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PromoCell/10X Red Blood Cell Lysis Buffer
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PromoCell
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6月15日,《新英格兰医学杂志》(NewEnglandJournalofMedicine,NEJM)的官网上挂出了FDA局长MargaretHamburg和美国国立卫生研究院(NIH)院长FrancisCollins共同撰写的文章。 两大机构的领导者在该文中称,两者正在共同致力于寻求最佳途径来开发新的治疗方法和 查看更多>
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2021-08-11
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目前各家仪器公司推出自己的数字PCR,目前市场主流的是三家,1、LIFETechnologies3D数字PCR(芯片式数字PCR):我个人认为是微孔数字PCR,主要是将20ul反应体系分散到20000个微孔中进行反应,变成20000个反应体系,PCR反应结束后,采用CCD拍照,数阳性反应孔。2、Bio-Rad的微滴数字PCR(油包水原理):将20ul反应体系采用液滴反应器形成20000个油包水反应体系,PCR反应结束后,才有流式细胞术的原理,检测每一个液体,数阳性反应的液滴数量。3、RainDance的数字PCR(油包水原理)、原理与伯乐微滴数字PCR相同,但是其液体形成能力比伯乐强很多,理论上可以产生1000万个小油滴。价格从高到底:Raindance、Bio-Rad、LIFETechnologies。目前本人使用的是Bio-RadQX200、正在做实验室,希望广数字PCR的使用者可以相互交流,相互解答疑问,更好的利用数字PCR。

本人利用总RNA做NASBA一直没有扩增结果求帮助
下图是NASBA的实验结果图
1-Markerds2000
2,3为平行试验其RNA的浓度均为10X4
4为只有模板的RNA样品的对照
定量pcr主要测的是基因的表达水平,比如不同时期 基因的表达有所差异,具体差异了多少倍,就可以使用了。
Taq DNA聚合酶使用说明书123
姆姆EH172017-10-03
1单位(U)Taq DNA 聚合酶力定义74°C、30钟内性化马哈鱼精DNA作模板/引物10nmol脱氧核苷酸掺入酸容物质所需酶量图" class="ikqb_img_alink">
比较简易的装置,可携带。但是通量小
数字pcr和荧光pcr哪个更准确在定量PCR时,我们常常纠结一个问题,究竟是相对定量还是绝对定量呢?如今,你无需纠结了,因为数字PCR(digitalPCR)来了。尽管这两种技术有些类似,都是估计起始样品中的核酸量,但它们有一个重要的区别。定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量,而数字PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。因此特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。
欢迎加入环介导的恒温扩增法(LAMP)讨论群70918628
荧光定量PCR_完整版123
小新20182021-08-22
本人最近接触荧光定量PCR上机之后图片是这样的不知道问题出在哪里希望有老师可以帮忙看一下谢谢第一个和第二个图片是目的基因第三个是内参


realtimeRT-PCR,测了模板CDNA浓度1800ng/ml,纯度在1.96左右,但是检测内参GAPDH,CT值都有30多,目的基因的CT更大了。请问问题在哪里,CT值大不就是因为模板量不够吗,可是现在这个浓度显然是充足的,怎么解释?
需要根据不同的样品来源,和相关的致病菌检测国家标准进行检测,也就是说对不同的样品其检测方法是不同的。一般情况下,需要先进行增菌,因为致病菌的含量往往很低,直接检测很可能检测不出,增菌过后再使用不同的培养基划线接种,分离出致病菌后进行生化鉴定,或者使用一些更先进的方法,比如PCR、质谱等等。恒温扩增法也有企业在用,但是新推出的技术,使用度比荧光定量PCR的要少一些
请问大家谁有数字PCR相关的资料,可不可提供一下啊,谢谢
半定量RT-PCR与定量RT-PCR的区别是半定量RT-PCR操作简便,可快速推测样品中特异mRNA的相对数量;而定量RT-PCB可实时定量,较半定RT-PCB更准确。

半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。
定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

半定量RT-PCR需要跑电泳,根据条带亮度的强弱来判断模板拷贝数的高低或者是表达量的高低,而定量RT-PCR则无需电泳可以实时监测整个PCR的全程并且由给出的Ct值及Standard Curve来判断gene拷贝数的高低。
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