利用 ConcertPlant 试剂从植物组织中纯化 RNA 实验
| 实验材料 | 植物组织 试剂、试剂盒 | ConcertPlantRNA试剂NaCl氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水 实验步骤 | 一、材料 1.缓冲液、溶液和试剂 ConcertPlantRNA试剂(Invitrogen)，4°C预冷 NaCl,5mol/L(无RNA酶） 氯仿 异丙醇 乙醇，75%,用DEPC处理过的水配置 DEPC处理过的水 2.细胞和组织 适宜的植物组织（见二、方法中1），液氮冻后磨细 二、方法 1.向不超过0.lg研磨过的植物材料中加0.5ml冷的（4°C)ConcertPlantRNA试剂。轻微振荡混合至样品重悬于试剂中。 2.室温下水平放置管子温育5min。 3.12000g离心2min以移去残渣。 4.将上清液转移到无RNA酶的新管中，并加0.1ml5mol/l的NaCl。在实验台上轻敲管子以混合。 5.加0.3ml氯仿，将管颠倒数次以混合。 6.4°C下12000g离心l0min。 7.将液相转移到无RNA酶的新管中。加等体积异丙醇至液相中。将管颠倒数次以混 合。室温下温育10min。 8.4°C下12000g离心样品10min。 9.小心移弃上清液，避免扰动沉降物。 10.将lml75%乙酵加到沉降物中。室温下12000g离心lmin。 11.移弃上清液，小心避免扰动沉降物。短时离心并吸去所有残留液体。 12.将沉降物再溶解于10~30ulDEPC处理过的水中。如看到任何泥浊，则在室溫下 12000g离心溶液1min。将上清液转移到无RNA酶的新管中，储存于-70°C。  |
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发布于 ： 2021-07-29
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