根据大小分离RNA:乙二醛化RNA的琼脂糖凝胶电泳
| 实验方法原理 | 这个方法将乙二醛变性和琼脂糖凝胶电泳结合了起来（从McMaster和Carmichael(1977),Thomas(1983)的方法修改而来）。RNA的自动乙二醛化、溴化乙锭染色及电泳缓冲液的修改由Burnett(1977）提供。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | RNA样品RNA大小标准参照物 试剂、试剂盒 | BFTE电泳缓冲液DMSO乙二醇乙二醇反应混合物RNA凝胶上样缓冲液 仪器、耗材 | 琼脂糖凝胶水平电泳装置透明尺水浴 实验步骤 | 一、材料 1.缓冲液和溶液 10XBFTE电泳缓冲液 DMSO 乙二醇 乙二醇反应混合物 RNA凝胶上样缓冲液 2.凝胶 琼脂糖凝胶 3.核酸和寡核苷 RNA样品 RNA大小标准参照物 4.专用装置 水平电泳装置 透明尺 预置到55℃的水浴 二、方法 1.配制乙二醛变性反应液。在无菌离心管中混合： RNA（总共10μg）1~2μl，乙二醇反应缓冲液10μl。 2.盖上离心管的盖子，将RNA溶液在55℃放置60min,在冰水中冰浴10min,然后离心5s，使所有液体沉到离心管底部。 3.在样品加热过程中，将琼脂糖凝胶装到水平电泳仪的盒子中。加入足够的1XBPTE电泳缓冲液，使其没过凝胶约1mmol/L。 4.将1~2μlRNA上样缓冲液加到乙二醛化的RNA样品中，然后马上把RNA样品加到凝胶加样孔中，留着两边最外面的两个孔不要加样。将RNA相对分子质标准参照物加到最外面的孔中。 5.以5V/cm的电压进行电泳，直到溴酚蓝迁移大约8cm。 6.将凝胶放在保鲜膜上，在紫外灯下观察RNA。把透明尺和凝胶对齐，在紫外灯下拍照。 7.在照片上量出从加样孔到各RNA条带的距离。以RNA片断大小的对数（log10）值对迁移的距离作图。用得到的曲线计算点杂交检测到的RNA的大小。 8.用上行或下行毛细管转移法把RNA固定在固体支持物上。  |
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发布于 ： 2021-08-19
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