What is your Protocol for RNAi on Cell Cultures?
来自 : 蚂蚁淘
- 6-WellPlates
- Bathing
- PreparedsRNAsUSPendedinwater.Weuse~500bpdsRNA.
- Add~10-30µgdsRNAtowellsof6-welltissuecultureplate.Weuse0.1-0.3µgin384-wellplatesfor25-50nMfinalconcentration.
- Countcells,thenspintopellet(~1200rpm,5").
- Resuspendcellsat1-5x106cells/mlinserumfreemedia.
- Plate1mlcellsintowellsof6-wellplate.Itdoesn"tseemtomatterifdsRNAorcellsareaddedfirst.
- IncubatedsRNAwithcellsatRTfor30".
- Add3mlcompletemediawith10%FBStoeachwell.
- Incubate3daysandanalyze.Lengthofincubationmayvarydependingonassay.
384-WellPlates- Bathing
- Remove384-wellplatespre-aliquotedwithdsRNAfromfreezertothaw.The384-wellplatescontain5ulof~0.05ug/uldsRNAinwaterfor~0.25ugdsRNA/well.ThedsRNAsare~500bp.
- Spinplatesat~1200rpmfor1".beforeremovingseals.
- Countcells,thenspintopellet(~1200rpm,5").
- Resuspendcellsat1-5x106cells/mlinserumfreemedia.
- Plate10ulcellsintowellsof384-wellplate.
- IncubatedsRNAwithcellsatRTfor30".
- Add30ulofcompletemediatoeachwell.
- Sealtheplatestopreventevaporation.
- Incubate3daysandanalyze.Lengthofincubationmayvarydependingonassay.
Transfection- Remove384-wellplatesfromfreezertothaw.The384-wellplatescontain5ulof~0.016ug/uldsRNAinwaterfor~0.08ugdsRNA/well.ThedsRNAsare~500bp.
- Spinplatesat~1200rpmfor1".beforeremovingseals.
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