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求助，做蛋白酶抑制试验，胃蛋白酶抑制剂不溶于水，需要先溶于甲醇再加入酶液里面吗，还是直接加入酶液里面就可以起作用呢，求大神指点啊

荧光素酶报告基因
Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。
中文名
荧光素酶报告基因
外文名
Luciferase
底 物
荧光素(luciferin)
生物荧光
bioluminescence
转录因子
反式作用因子
转录因子
行使调控基因表达的蛋白质分子

简介
Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。
应用原理
转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异序列结合，这些特异性的序列被称为顺式作用元件，转录因子的DNA结合域和顺式作用元件实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验（luciferase assay）是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。
其原理简述如下：
（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic等。
（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。
（3） 加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光，通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。
技术流程
（1） 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。
（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。
（3）筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。
（4） 扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。
（5） 培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。
（6） 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。
（7）提取蛋白并用于荧光素酶检测。
（8） 加入底物，测定荧光素酶的活性。
（9） 计算相对荧光强度，并与空载对照比较。
发展
双荧光素酶报告基因测试∶ 结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时, 通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal, GUS)不够便利,因为各自的测试化学,处理要求检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL 载体系统,表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶,在单管中进行双荧光素酶报告基因测试,快速,灵敏,简便。系统还提供 PLB裂解液,用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞,不需操作单个样品。对于正在使用萤火虫荧光素酶报告基因载体的研究人员。双荧光素酶报告基因测试系统将使他们体会到该系统的便利。
体外分泌的荧光素基因:目前NEB公司提供新型的可在细胞外分泌的荧光素酶,分别是Gluc和Cluc,具体使用帮助可在NEB官方网站找到.展开

相关疾病：肝炎肝癌肝硬化药物性肝病酒精性脂肪肝第八版的诊断书上的这三句话看起来是矛盾的……请问肝硬化时到底应该是怎样的？

无论从哪方面看，肥胖症患者已经是够痛苦的了。如果使用的减肥药还会派生出许多副作用。那么无疑给肥胖者雪上加霜，不堪重负。于是一些副作用相对小一些的减肥药，如吸收阻碍类的脂肪酶抑制剂就广为肥胖者所接受。所谓吸收阻碍类减肥药就是通过药物来抑制人体肠道对食物的消化和吸收，从而达到减少热量摄入，减轻人的体重。这类中比较有代表性的就是脂肪酶抑制剂。在人的肠道中有一种专门将脂肪分子分解成很小的，可以被肠道吸收的酶，就是人们较熟悉的脂肪酶。而脂肪酶抑制剂就是专门用来对付脂肪酶的减肥药。在脂肪酶抑制剂的作用下，脂肪酶将失去部分的分解能力，因而大约有三分之一的脂肪没有被脂肪酶分解，随食渣一起被排出体外。脂肪酶抑制剂之所以受欢迎，就是它能将人摄入的部分脂肪在进入体血液之前就排出了体外，这样可以从脂肪的源头控制脂肪在人体内的聚积。但是脂肪酶抑制剂也有一定的副作用。因为如果过多地将脂肪排出了体外，会影响脂溶性维生素的吸收，所以这种抑制剂不能长期使用。此外，脂肪酶抑制剂对胃肠的刺激较大。

医院检验中的肝功能项目，包括胆红素、白蛋白、球蛋白、转氨酶、r-谷氨酰转肽酶等等。其中转氨酶是什么意思，其数值到底代表着什么含义呢?下面为大家详细介绍一下： 1.谷丙转氨酶：正常范围是0--40的标准。 2.谷草转氨酶：正常范围是0--40的标准。 谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)反映的是肝细胞受损的情况，是衡量肝功能的最直接的指标，如果谷丙转氨酶/谷草转氨酶的比值大于1，说明肝脏细胞有损伤，有些人会有疼感，在这里建议3个月到6个月检查一次，并做B超，检查一下有没有肝脏增厚硬化的迹象，如果有，必须注意治疗，减少向肝脏纤维化、硬化或导致癌变发展的可能性。如果数值偏高，HBVDNA也偏高，就说明有肝损伤。谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)偏高的话除了要保肝降酶，同时还需要进行抗纤维化治疗，避免肝纤维化，保肝降酶。 谷丙转氨酶升高，临床上有很多可能可引起转氨酶异常，必须加以鉴别 1.剧烈运动、过于劳累或者近期吃过油腻食物，都可能使转氨酶暂时偏高。 2.长期酗酒导致酒精肝或饮食结构不合理导致脂肪肝，造成转氨酶高。 3.化学制剂与一些其他的药物，如红霉素、解热镇痛、保泰松等都可引起ALT升高，停药以后，ALT很快恢复正常。 4.其他一些感染性的疾病，如伤寒、肠伤寒、流脑、疟疾、胆囊炎、流感、麻疹、血吸虫病、挤压综合征等，都有转氨酶升高的现象。 以上大概解释了肝功能转氨酶的意思。以血清酶检测常用：谷丙转氨酶ALT(GPT)、谷草转氨酶AST(GOT)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT或GGT)等。以上各项酶在肝细胞中均有存在，当肝细胞膜受损或细胞坏死时，这些酶进入血清便增多。通过测定血清或血浆中酶的活性，即可反映肝细胞受损情况及损伤程度。 在各种酶试验中，ALT和AST能敏感地反映肝细胞损伤与否及损伤程度。各种急性病毒性肝炎、药物或酒精引起急性肝细胞损伤时，血清ALT最敏感。而在慢性肝炎和肝硬化时，AST升高程度超过ALT，因此AST主要反映的是肝脏损伤程度。

活体动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶基因（
Luciferase
）
标记细胞或
DNA
，而荧光技术则采用绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白等荧光报告基因和
FITC
、
Cy5
、
C
y7
等荧光素及量子点
(quantumdot
，
QD)
进行标记。

小动物活体成像技术是采用高灵敏度制冷
CCD
配合特制的成像暗箱和图像处理，使得可以直接监
控活体生物体内的细胞活动和基因行为。实验者借此可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、
感染性
疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。

由于具有更高量子效率
CCD
的问世，使活体动物体内光学成像技术具有越来越高的灵敏度，对肿瘤微
小转移灶的检测灵敏度极高；另外，该技术不涉及放射性物质和方法，非常安全。因其操作极其简单、
所得结果直观、
灵敏度高、
实验成本低等特点，
在刚刚发展起来的几年时间内，
已广泛应用于生命科学、
医学研究及物开发等方面

转氨酶与肝功能

大多数肝病患者都把转氨酶和肝功能相提并论，提起肝功能，马上就想到转氨酶的高低。其实这种想法是有一定错误的，转氨酶只不过是临床上常用的检查肝脏功能的一项指标，转氨酶的正常与否，并不能代表肝功能的好坏，转氨酶的高低也不是与肝脏功能状态呈比例的。

一、肝脏有哪些功能

人体的肝脏一般在1250克左右，是一个重要的器官，人不能离开肝脏而存活。有人称肝脏为人体的“加工厂”，这不仅不过分，而且也只表达了肝脏的一部分功能而已。肝脏的功能包括：第一，代谢功能。其中包括了合成代谢、分解代谢和能量代谢。人每天摄入的食物中含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素和矿物质等各种营养物质，这些物质在胃肠内初步消化吸收后被送到肝脏，在肝脏里被分解，“由大变小”，蛋白质变（分解）为氨基酸、脂肪分解为脂肪酸、淀粉分解为葡萄糖，等等，分解后的“小物质”又会根据身体需要再在肝脏内被合成为蛋白质、脂肪和一些特殊的碳水化合物或能量物质等，这是一个“由小变大”的过程。经过这个过程之后，摄入的营养物质就变成了人体的一部分，也就不会“吃猪肉长猪肉了”。在此顺便纠正一下人们普遍存在的某些错误的诸如吃肺补肺，吃肝补肝，吃脑补脑，甚至吃雄性动物的生殖器能够“壮阳”等荒谬的所谓“理论”。可想而知，如果肝脏“罢工”，人体的营养来源就会中断，生命也就危险了。第二，解毒功能。人体代谢过程中所产生的一些有害废物及外来的毒物、毒素、药物的代谢和分解产物，均在肝脏解毒。第三，胆汁生成和排泄：胆红素的摄取、结合和排泄，胆汁酸的生成和排泄都由肝脏承担。肝细胞制造、分泌的胆汁，经胆管输送到胆囊，胆囊浓缩后排放入小肠，帮助脂肪的消化和吸收。第四，造血、储血和调节循环血量的功能。新生儿的肝脏有造血功能，长大后不再造血，但由于血液通过两根血管（门静脉和肝动脉）流入肝脏，同时经过另一根血管（肝静脉）流出肝脏，因此肝脏的血流量很大，肝脏的血容量相应地也很大。如此说来肝脏就象一个仓库，在需要时可以供出一部分血液来，为其他器官所用，比如一个人发生了消化道大出血，血液容量急剧下降，心、脑、肾经受不住缺血，肝脏就可以帮一些忙了。第五，免疫防御功能。肝脏是最大的网状内皮细胞吞噬系统，它能通过吞噬、隔离和消除入侵和内生的各种抗原。另外，肝脏里的淋巴细胞也有很高含量，尤其是在有炎症反应时，血液或其他淋巴组织里的淋巴细胞很快“赶”到肝脏，解决炎症的问题。

二、如何正确认识“转氨酶”

通过以上所述大家对于功能已有基本的发解。是以，“转氨酶”水平的高低几乎不能反应肝脏的功能，转氨酶不过是肝细胞里面的一种成分而已，相比较而言这种成分在肝细胞中的含量比较高，肝细胞一旦遭到打击和破坏，转氨酶就被释放到了血液。而在这个时候，如果损害的肝脏细胞不多，肝脏完全能够正常工作。我们又可以再次用“加工厂”来说明这个问题，要维持正常人的生存，或正常的生命活动，大约只要有1/3的肝脏“开工”即可，就象有些工厂，生产能力大于市场需求，部分工人或部分机器停工不会影响生产线的正常运转。

但是，如何正确认识转氨酶的确是有点学问的。我们说转氨酶水平的高低不能完全代表肝功能的好坏，更确切地说转氨酶水平与肝功能状态不成平行关系。概要地有这么几种情况：①转氨酶水平正常，肝脏损害持续存在。见于某些肝炎病人，比如所谓慢性乙型肝炎病毒携带者，这些人乙型肝炎病毒指标一直阳性，但转氨酶从来没有升高过，可是如果对这样的病人做肝脏活组织检查却能发现肝脏的炎症反应很严重，有的已经发生了纤维化，甚至肝硬化和肝癌；还有不少急性和慢性丙型肝炎病人也有类似情况。②转氨酶水平很高，但不过是一时性的肝损害，不会给肝功能造成很大影响，后果也不很严重，比如服用某种对肝脏毒性较强的药物。我们医院就曾经有位老教授，生病住院期间，就因为吃了一粒药物，转氨酶升高到2 000多单位，停药后两天就恢复到正常；另外，大多数急性甲型肝炎病人在发病期转氨酶水平很高，经过短期休息和治疗后很快恢复正常；一次性大量喝酒也会有类似现象。③黄疸很深，转氨酶不高，甚至正常。有三种情况：一是胆道阻塞，胆汁排泄不畅，做肝功能试验检查时发现血液胆红素很高，而转氨酶不高或轻度升高，可见于胆管结石、胆道和胰头周围的肿瘤患者；二是重型肝炎。这是一种很严重的肝病，病死率很高。患病的早期，转氨酶有不同程度的升高，胆红素在较高的水平上，但随着病情的进展，胆红素越来越高，转氨酶反而下降，及至正常，医学上称之为“胆酶分离”，这是病情严重的信号，靠药物治疗恐已无济于事，条件允许时最好及时做肝移植手术。我们医院在这两年里就处理过十几例这样的病人，其中有一家三兄弟均为严重肝病，经过肝移植后恢复得很好。三是淤胆型肝炎。可由多种原因引起，以肝内小胆管损害为主，导致胆汁分泌异常，比如各种少数急性黄疸型肝
炎、药物性肝炎、妊娠等。④某些肝硬化和肝癌病人，尽管得了晚期肝病，肝功能很糟糕，但转氨酶却是正常的。不少人因为有了大量腹水、消化道出血，或者体检时发现其他异常才得知原发疾病。需要提醒的是，这些所谓“少数”病人在我们医生的病例记载里却不算少，在人们的生活水平普遍提高的今天，每年1～2次健康体检是不可缺少的，能发现不少发病很隐匿、进展很缓慢的疾病，隐源性肝硬化是其中一种。⑤转氨酶长期异常，但水平不高。这多见于慢性肝炎病人，包括慢性乙型和丙型肝炎、自身免疫性肝炎、长期大量饮酒后的酒精性肝炎等。像这种转氨酶水平不是很高，大多在100～200单位之间，或者小于100单位的慢性肝炎病人最需要重视，因为这类病人的人数最众，病情持续发展，预后也最差，最终要发展为肝硬化或肝癌。宜及早采取恰当的治疗，尤其是病毒性肝炎病人的抗病毒治疗。⑥最后还有一类现代文明病，即脂肪肝，表现为转氨酶轻度升高，一般不超过100单位，这种人一般体重超标，或严重超标。近几年来在我们国家“脂肪肝”的发病率逐年上升，这与饮食结构不当、饮食过量、嗜酒无度、缺乏运动等有关，是典型的“富贵病”。过去人们称结核病为“富贵病”，意思是说只有富贵人才生得起的病，实在是一种讽刺。现代人中发病率不断攀升的脂肪肝、高血压、糖尿病、冠心病、胆石症才是真正的富贵病，该引起我们警惕了！

关于“转氨酶”还有一个称谓的问题值得一提。在大众口头上，“转氨酶、GPT、PT、大PT、小PT”用得比较混乱。医学上被简称为转氨酶的有两种，分别是“丙氨酰氨基转移酶”和“门冬氨酸氨基转移酶”。过去分别用英文字母GPT、GOT来简称，现在称ALT和 AST，各家医院的肝功能化验单上都注明了这两种转氨酶，他们都是肝细胞内的酶，如果两种都比较高，而且AST水平超过ALT，一般说明肝细胞损害比较严重，而且特别多见于酒精性肝炎。
参考资料：http://www.labmed.cn/jiaoxue/hychsh/200507/839.html展开

是使超级螺旋松弛。所谓超级螺旋是DNA中张力积聚的形式。拓扑异构酶抑制成分是重要抗肿瘤药物，被认为通过稳定拓扑异构酶与DNA之间所形成的一种共价复合物来发挥作用，后者又为DNA复制机制设置了一障碍。科学家对以拓扑异构酶为作用目标的药物的药效起源仍不是很了解。本期封面图片所示为由于该药物的作用而造成的正向DNA超级螺旋的积累。DNA的这种超级缠绕会妨碍一种DNA聚合酶的前行，并且在阻止或破坏复制叉，从而导致细胞死亡过程中也可能扮演一个角色。向左转|向右转

辅酶、辅基和激活剂
根据酶催化反应最适条件的要求，原则上在酶测定体系中应加入一定量的辅助因子。辅助因子（cofactors）是指酶的活性所需要的一种非蛋白质成分，包括辅酶、辅基和金属离子激活剂。与酶紧密结合的辅因子称为辅基；不含辅基的酶蛋白称为脱辅基酶蛋白（apoenzyme），没有催化活性，必须加入足量辅基，和它结合成为全酶（holoenzyme），才有催化活性。脱辅基酶蛋白与辅基孵育一段时间后，酶活性才会恢复，因此，往往需要样品与试剂中的辅基先预孵育的过程。辅基的用量往往较少。
与酶蛋白结合很松弛，用透析和其它方法很易将它们与酶分开的称为辅酶（Coenzyme）。辅酶尽管不同于酶的底物，但在作用方式上和底物类似，在酶反应过程中与酶结合、分离及反复循环。辅酶用量的确定可将它们按底物处理。例如乳酸脱氢酶中辅酶按双底物动力学方程计算。
激活剂（activator）的化学本质是金属离子，可以是酶的活性中心，也可以通过其他机制激活酶的活性。作为激活剂的金属离子，其影响酶促反应的动力学更加复杂。最常见的是二价金属离子如Mg2+、Zn2+、Mn2+、Ca2+、Fe2+等。重金属离子大多是酶的变性剂。金属离子之间往往存在相互拮抗或相互抑制。在酶测定体系中经常加入EDTA目的是螯合一部分非必要的离子。合适的金属离子浓度是必要的，过量的离子往往抑制酶反应速度。由于激活剂的动力学往往与酶的动力学不同，这就可以解释不同的样品与反应液的比例，造成酶活性测定结果的不呈比例。N-乙酰半胱氨酸对肌酸激酶的激活作用与此类似。激活剂的用量一般通过反复实验来确定。
辅酶Q-10有助于：（1）保护心脏：
辅酶Q-10有助于为心肌提供充足氧气，预防突发性心脏病，尤其在心肌缺氧过程中辅酶Q10发挥关键作用。
（2）促进能量转化，提升精力：
辅酶Q-10帮助把食物转化为细胞生存必需的能量（如ATP），使细胞保持最佳状态，使人感觉精力更充沛；
（3）提高免疫力，延缓衰老：
辅酶Q-10是细胞自身产生的天然抗氧化剂，可阻止自由基的形成，有助于维护免疫系统的正常运作及延缓衰老；
近年来的研究表明，辅酶Q-10在预防冠心病，缓解牙周炎，治疗十二指肠溃疡及胃溃疡及缓解心绞痛方面有显著效果。同时还有抗肿瘤作用，临床对于晚期转移性癌症有一定疗效。
各种辅酶在生物体正常生长发育中，发挥各种重要的作用，使生命活动有序的进行。向左转|向右转

记得08年左右的时候，正是辅酶Q10大行其道之时。各大品牌都在广告里力推含辅酶Q10的护肤品，说得很神奇，抗皱紧肤什么的。近几年发现很少有护肤品含有辅酶Q10了，广告也没有再提过Q10的事？请问是不是这东西没用，或是有副作用？为什么大牌护肤品都放弃Q10了...

相同点：都有酶参与的反应。不同点：化学修饰是由酶催化引起的共价键的变化酶不直接参加反应，而变构调节中酶参与了调节。　　变构调节：就是指小分子化合物与酶蛋白分子活性中心以外的某一部位特异结合，引起酶蛋白分子构像变化、从而改变酶的活性。生理意义：1代谢终产物反馈调节反应途中的酶，使代谢物不致生成过多；2使能量得以有效利用，不致浪费；3不同代谢途径相互调节。　　化学修饰：酶蛋白肽链上某些残基在酶的催化下发生可逆的共价修饰，从而引起酶活性的改变，这种调节称为酶的化学修饰。　　2、化学修饰的特点：　　（1）绝大多数属于这类调节方式的酶都具无活性（或低活性）和有活性（或高活性）两种形式。它们之间在两种不同酶的催化下发生共价修饰，可以互相转变。催化互变反应的酶在体内受调节因素如激素的控制。　　（2）和变构调节不同，化学修饰是由酶催化引起的共价键的变化，且因其是酶促反应，故有放大效应。催化效率长较变构调节高。　　（3）磷酸化与脱磷酸是最常见的酶促化学反应。

可以。
　　脂肪氧化酶可催化氧分子对面粉中的具有戊二烯1.4双键的油脂发生氧化，形成氢过氧化物，并氧化蛋白质分子中硫基（-SH）形成二硫键（-S-S-），诱导蛋白质分子聚合，从而起到增强面筋的作用，防止面筋蛋白水解，破坏胡萝卜素的双键。可见，脂肪氧化酶具有强筋和漂白双重功效，可以替代漂白剂过氧化苯甲酰。
　　常见面粉添加剂：
　　1、增筋类面粉添加剂，俗称面粉增筋剂，主要成分是VC等，提高面粉的筋度，使面粉可以满足生产拉面、水饺等高档面条的需要；
　　2、面粉品质改良剂，可以全面的提高面粉的品质，使面粉从筋度、延伸性、稳定性等指标都可以满足高档面制品生产的需要；
　　3、面粉增白剂，也就是稀释过氧化苯甲酰，其主要化学物质是过氧化苯甲酰，也就是俗称的“面粉增白剂”。该种物质具有强氧化作用，加快面粉的后熟，使面粉常温下需要半个月的后熟时间缩短为3-5天，它可以缓慢地氧化面粉中的叶黄素、胡萝卜素，使其由略带黄色变为白色。这就是为什么叫面粉增白剂的原因。
　　4、面粉减筋剂，可以破坏面粉的筋度，使面粉可以用来生产饼干、桃酥等不需要筋度的食品。
　　5、面包改良剂，添加到面粉中，使面包的内部组织结构细腻，气泡均匀，从而加工出来品相很好的面包。面包改良剂在西方国家被广泛的应用，我们国家的面粉品质本身不能满足加工面包的需要，必须添加面包改良剂才可以生产出合格生产面包。