免疫组化SP法步骤
SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法.按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)；按结合方式可分为抗原—抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法和亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是最常使用的方法。一般的sp法步骤啊,具体如下：1.烤片，68℃，20分钟,2.常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；二甲苯I20min--二甲苯II20min--100%酒精I10min--100%II10min--95%5min--80%5min--70%5min3.阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O237℃孵育10min，PBS冲洗3X5min；4.抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液（PH6.0）中用煮沸（95℃，15－20min），自然冷却20min以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5min。5.正常羊血清工作液封闭，37℃10min，倾去勿洗.6.滴加一抗4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5min（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）；滴加生物素标记二抗,37℃孵育30min,PBS冲洗3X5min;7.滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min,PBS冲洗3X5min;8.DAB/H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。
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发布于 ： 2021-08-18
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