western blot失败经验总结1
我做了很久的WB，最大的一个难点感觉在于样品制备上！蛋白的降解有些时候是你想象不到的，可能出奇的糟糕，也可能完全没事~~如果单独做WB的话，感觉以“快速彻底裂解，先变性后保存”的原则比较有效，尽量选择足够强的裂解液，甚至直接给loADIngbuffer裂解，然后取出部分蛋白定量，其余加入loadingbuffer100度充分变性，再分装保存。有些时候比蛋白酶抑制剂更有效。另一个感觉就是样品中目的蛋白的量，限于WB的检测下限问题，一般目的蛋白量最好别低于1ng（虽然ECL法下限是0.1ng，即100pg），最好在10ng以上为好。这就要求在做WB之前必须充分考虑目的蛋白的可能丰度，最好充分的准备工作然后再设计细胞量或者组织量，千万别把样品搞稀了，否则就不好办了。最后，还是多看文献，在做某个蛋白之前最好看看别人是如何做的，有什么特殊要求，内参如何选等等。
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-12-26
阅读（115）
▍
相关分类
▍
相关文章
KEMCO 寿技研工业株式会社
pET载体pET 15b A+,pET 16b A+,pET 17b A+
颜宁研究组揭示真核电压门控钙离子通道复合物Cav1.1的三维结构
Antibody/Protein Labeling Kit – FITC | MCE
Colony Formation Assay_
Western blotting 的实验心得.ppt 免费在线阅读
GCN5 antibody (mAb)_Active Motif_
The production of monoclonal antibody by hybridoma 实验方法...
western blot的一抗和二抗是如何作用的?
免疫组化的发展简史
德国Lipoid GMBH 磷脂氢化大豆磷脂酰胆碱_中国教育装备采购网
RPA核酸检测系列eshot第一辑_胜创生物
▍
相关问答
