주문정보
- - 재고수량은 변동될 수 있습니다.
- - 재고 확인 시 "갱신" 버튼을 누르시면 실시간 재고를 확인하실 수 있습니다.
- - 가격이 ‘별도문의‘ 시, 상단 ‘견적신청’ 버튼을 눌러 문의해주시면 빠른 답변을 받으실 수 있습니다.
선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
---|
제품특징
□ 내용 (50 검체용)
2× Premix Solution | 250 ㎕ × 10 (100 반응분) |
Primer Mix ENT (5 uM each) | 125 ㎕(50 반응분) |
Primer Mix BS (5 uM each) | 125 ㎕(50 반응분) |
Positive Control ENT | 25 ㎕(10 반응분) |
Positive Control BS | 25 ㎕(10 반응분) |
dH2O (멸균수) | 1 ㎖ × 3 |
10% Chelex Solution | 12 ㎖ × 2 |
□ 보존
- 10% chelex Solution : 4℃- 그외 : -20℃
□ 제품설명
식품 안전성에 대한 소비자의 신뢰감을 확보하기 위해 식품 공급의 각 단계에있어서 품질 보증이 중요시되고 있다. 이를 위해 다양한 검사 방법이 활용되고있다. PCR법을 이용한 신속한 검사법은 유용한 방법 중의 하나이다.본 키트는 ENT primer에 의해 대장균과 살모넬라균을 포함한 장내 세균과의 균류 BS primer에 의해 Bacillus cereus을 포함한 Bacillus속, 황색 포도상구균을 포함한 Staphylococcus속의 균류의 16S rRNA. 또 증균 배양액을 이용하는 것으로검사 시료에 포함되어 있는 소수의 살아있는 균도 단시간에 검출할 수 있다.
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
1.目的
学会PCR操作的基本技术。
2.原理
是将待扩增的DNA模板加热变性,与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性,然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环,n次循环后DNA可被扩增(1+X)n倍。其中<25nt的引物退火温度Tm=2(A+T)+4(G+C)。
3.器材
旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,0.2mlPCR微量管,双面微量离心管架,PCR仪,台式离心机,琼脂糖凝胶电泳系统,水漂,恒温水浴。
4.试剂
5U/μlTaqDNA聚合酶,PCR缓冲液(10×,MgCl2free),25mMMgCl2,dNTP,引物,模板质粒pBS-CHI,无菌ddH2O。
5.实验准备
dNTP混合液(每种25mM),TAE电泳缓冲液,荧光染料,10´加样缓冲液,1.5ml离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器吸头装入相应的吸头盒(灭菌)。合成的引物:Senseprimer5'-GGATCCACAATGATGAGAGCC-3'
Antisenseprimer5'-GATATCATGGTGAGGTAGCTAGCTT-3'
目的基因模板质粒:已经克隆在pBS载体上的1128bp几丁质酶(chitinase,CHI)基因。
待扩增的CHI片段长度:996bp。
6.操作步骤
(1)在0.2mlPCR微量离心管中配制50μl反应体系。(以下加样量供参考,括号内是最终需要量,实验时需参照Taq酶说明书计算)
ddH2O32μl
10×PCRbuffer(不含MgCl2)5μl
25mMMgCl23μl
2.5mmol/LdNTP4μl(每种dNTP终浓度0.2mM)
10μmol/LPrimer12μl(12.5~25pmoles)
10μmol/Lprimer22μl(12.5~25pmoles)
模板质粒1μl(1×10-3pmoles)
5U/μlTaq酶1μl(5U)
总体积50μl
(2)根据厂商的操作手册设置PCR仪的循环程序:
①94℃5min
②94℃1min
③54℃1min
④72℃1min50s
⑤goto②29times
⑥72℃10min
(3)PCR结束后,取10μl产物进行琼脂糖凝胶电泳。观察胶上是否有预计的主要产物带。
(4)清理桌面,撰写实验报告。
(5)PCR产物可以直接与T载体连接(见实验五),然后转化感受态细胞(见实验八)。
7.思考
(1)复性温度如何确定?
(2)为什么要在最后延伸10min?
(3)是否有非特异性扩增产物(或引物二聚体),如何才能消除?
更多资讯请关注于http://www.chinazglab.com/
(2)操作多份样品时,应先配制反应混合液并分装,减少操作,避免污染,同时增加反应的精确度。试剂的配置和分装应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台操作。
(3)移液器和吸头需专用。由于移液器极易受气溶胶或模板核酸的污染,移液器应尽可能使用可替换或可高压处理的,吸头尽可能使用带滤芯的吸头。
(4)防止操作人员污染,使用一次性手套,EP管与吸头应一次性使用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染。
(5)加样或吸取模板核酸时要十分小心,吸样要缓慢,防止样品进入移液器内;吸样时尽量一次性完成,忌多次抽吸,以免交叉污染或产生气溶胶污染。
(6)EP管打开应先离心,将管壁及管盖上的液体甩至管底部。开管动作要轻,以防管内液体溅出。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面。
(7)模板核酸应密封保存,防止外溢及外来核酸的进入。
(8)设立适当的阴阳性对照及重复实验,既可验证LAMP反应的准确性,又可以协助判断扩增系统的可信性。
(9)扩增产物应妥善处理,尽量避免开盖检测,开盖极易产生气溶胶污染。本公司的试剂均采用闭管检测,有效防止污染发生。展开
暂无品牌问答