实验方法原理 | 将植物的幼嫩器官如根尖、茎尖和幼叶等经过处理后,被涂抹或压在载玻片上,使组织成一薄层然后进行观察的制片方法。染色后可做临时的观察标本,也可以经过脱水、透明等步骤制成永久的玻片标本。 | ||||||||||
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实验材料 | 植物的幼嫩器官如根尖、茎尖和幼叶 试剂、试剂盒 | 酒精 仪器、耗材 | 玻片镊子 实验步骤 | 1幼根的培养 取洋葱或大蒜的鳞茎置于广口瓶上,瓶中盛满清水,使洋葱或大蒜的下部(鳞茎盘)浸人水中,置于温度在20-25℃的温暖处,并注意每天换水,3-5d后,即可长出幼根。 2材料的固定和离析 先用等量的浓盐酸和95%酒粘配成混合液,这种溶液既能迅速杀死细胞并保其细胞结构接近于生活状态,又能溶解细胞间的中胶层,在压片时使细胞易于分散,故称其为固定离析液。当上述幼根长到2-3cm时,即可进行固定和离析处理。具体方法是在上午10-11点之间,将3mm左右的根尖剪下,立即投入上述固定离析液中,经3-5min,取出放入清水中漂洗几次即可制片。也可经过50%的酒精后将其保存在70%酒精中保存备用(在4℃冰箱中可保存7-10d)。 3压片的制作 取一个经过固定离析的根尖,放在干净的载玻片上,加一滴0.5%的龙胆紫染液染色2min,用解剖针轻轻将根尖压裂,再盖上盖玻片,用右手大拇指对准盖玻片下的材料,垂直均匀用力下压,将材料压成均匀的、单层细胞的薄层,用吸水纸条吸去溢出的染液即可在显微镜下观察,这时可以看到许多离散的各个分裂时期的细胞。若染色过浅,可在盖玻片一侧冉加一滴染液染色;如果染色过深,可在盖玻片一侧加一滴45%的乙酸进行褪色。 上述压片也可用小麦、水稻的颖果和蚕豆等种子萌发出根后制作。但要注意不同植物根尖细胞有丝分裂活动的高峰是不同的,所以取材固定的时间也不一样,如小麦在上午11时至下午1时,水稻在下午4时左右,玉米和蚕豆除在上午有一个高峰外,若下午进行实验,可于3-4时固定,也可获得分裂相较多的根尖细胞有丝分裂压片标本。如果是事先固定的材料,上课时分发给学生使用,则可于午夜12时取材,分裂相更多。若将材料用秋水仙素进行预处理和低温固定,所制得的压片中细胞分裂相会更好,且染色体清晰可见,可用丁观察细胞染色体的形态、数目和组型分析。 注意事项 | 其他 | |