淋巴细胞转化试验
淋巴细胞转化实验（Lymphocyte transformation test-LTT）(1)
作者：中华医学网发布时间：2017-10-12 08:37浏览： 次
T淋巴细胞表面具有植物血凝素（PHA）和刀豆蛋白（ConA）等非特异性有丝分裂原受体,在体内或体外遇到有丝分裂原刺激后,可转化为淋巴母细胞,依其细胞转化程度可测定T细胞的应答功能,称为淋巴细胞转化试验。
淋巴母细胞的主要特点：
（1）形态学改变:细胞体积明显增大,为成熟淋巴细胞3-4倍。核膜清晰,核染色质疏松呈网状。核内见明显核仁1-4个。胞浆丰富,嗜碱性,有伪足样突出。胞浆内有时可见小空泡。
（2）细胞内核酸和蛋白质合成增加。
（3）细胞代谢功能旺盛。
利用淋巴母细胞的不同特点，目前有多种实验方法可用于淋巴细胞转化程度的检测。根据其形态学改变，可通过体内法和体外法检测；根据细胞内核酸和蛋白质合成增加的特点，可通过 3 H-TdR 掺入法检测；根据细胞代谢功能旺盛的特点，可通过 MTT 法进行检测。
一、淋转试验形态学检查法（体内法） [实验原理] 在体内，当外周血T淋巴细胞遇到PHA 或ConA后可发生转化形成淋巴母细胞,通过采集外周血涂片染色,镜下计数100-200个淋巴细胞,计算其转化率。转化率高低可反映机体细胞免疫水平, 因此常作为检测细胞免疫功能的指标之一。形态学方法简便易行，但结果受操作和主观因素影响较大。
[实验材料] 1. ConA 溶液：根据ConA的纯度配制成最适浓度，一般为0.3-0.5mg/ml。
2.姬姆萨染液或瑞氏染液。
3.玻片、离心机、显微镜、计数器等。
[实验方法] 1.实验前3天，每只小鼠腹腔注射ConA0.3-0.5毫克。
2.3天后,通过摘除小鼠眼球采集外周血,加入预先加有肝素的试管中。
3.涂片:取1小滴抗凝血滴在玻片中央,用推片将血液涂开。自然干燥。
4.固定:取甲醇1-2滴滴在涂片上,自然干燥。
5.染色:加姬姆萨或瑞氏染液2滴于涂片上,同时加2滴水,用吸管水平涂开,使染液均匀覆盖涂抹面,染色时间为5-10分钟。
6.自来水细水冲洗染液,然后用吸水纸轻轻吸干玻片上的液体。
7.显微镜观察结果,计数淋巴转化细胞,计算转化率。
[实验结果] 转化过程中,常见的细胞类型有：淋巴母细胞、过度型淋巴母细胞、核分裂相细胞和成熟淋巴细胞等。计数时,过度型淋巴母细胞和核分裂相细胞亦作为转化细胞。
转化率=转化的淋巴细胞数/（转化的淋巴细胞数+未转化的淋巴细胞数） 100%
二 淋转试验3H-TdR掺入法 [实验原理] T淋巴细胞受 ConA或PHA激活后,进入细胞周期有丝分裂。当进入细胞周期S期时,细胞合成DNA量明显增加,在培养基中加入氚（3H）标记的DNA前身物质胸腺嘧啶核苷（TdR）,则3H-TdR 被作为合成DNA的原料被摄入细胞,掺入到新合成的DNA中。根据同位素掺入细胞的量可推测淋巴细胞对刺激物的应答水平。掺入的同位素3H,经液体闪烁测量法测出,将3H每分脉冲数（cpm）加以计算,用不同公式表示结果。
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发布于 ： 2018-08-06
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