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现在国内最差也是用3代试剂,有些地方会用4代试剂。
4代试剂(检查抗原+抗体)——窗口期为4周。因为抗原于3-4周达到复制的峰值,此时通过4代试剂检查,如果感染了HIV,抗原/抗体至少有一个为阳性,如果都是阴就排除了。
3代试剂(只查抗体)——窗口期为6周。
以上为理论分析+临床经验的结果,可以说是99.9%的准确度。
但是目前FDA、CDC和试剂生产商统一达成的共识,也就是针对普通人,最保守的窗口期是3个月。无论什么试剂,3个月都100%排除。
(2)封闭:将已包被的板用洗涤液洗涤2次,每孔加入120 μL封闭液,封闭一段时间,取出,甩干备用。
(3)竞争反应:在制备好的板中每孔加入50 μL系列浓度的标准品溶液和50 μL稀释好的酶标抗体溶液,孵育一段时间。
(4)洗板:用洗涤液洗涤5次。
(5)显色反应:每孔加入显色溶液100 μL,孵育一段时间。
(6)终止:每孔各加入终止液,在酶标仪上测定各孔的吸光值。
第一次:包被抗体浓度为:8ug/ml,4,2,1,0.5,0.25,0为A,B,C,D,E,F,G
血清稀释度为1:100
酶标抗体稀释度为:1:1000,1:5000,1:10000,1:25000为1,2,3,4
结果为:1234
A3.3440.7120.4900.238
B2.7570.5230.3450.176
C2.4280.4550.3100.172
D>4.51.7771.2150.439
E>4.51.3570.7890.424
F1.1090.2540.1720.110
G1.3660.3310.1970.069(空白)从结果可以判断包被抗体浓度1ug/ml最合适
第二次:包被抗体1ug/ml
血清稀释度为1:25,1:50,1:100,1:150,1:200,1:250,1:300,空白为A,B,C,D,E,F,G,H
酶标抗体稀释度为:1:1000,1:5000,1:10000,1:25000为1,2,3,4
结果为:1234
A2.9930.6390.3380.236
B3.0210.7220.3070.191
C2.3360.4960.3080.176
D2.2560.4640.3040.176
E2.0310.4160.2470.139
F1.8300.3360.2310.153
G1.5980.3320.2270.132
空白H0.1580.0780.0720.074
这样的话应该是血清稀释度1:50最合适,酶标抗体稀释度1:1000最合适,但是这样的话OD值为3.021,是不是太大了?OD值是不是在1左右比较好呢?应该选择哪个浓度,哪个稀释度来做正式试验呢?
如果用双抗体夹心法,第二个抗体可以用多抗,这样保证你的抗原会被结合,多抗可以直接带HRP标记或者可以用HRP标记二抗去和多抗结合。



