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1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释，为什么？我试过非梯度稀释的，也可以达到线性R2=0.99.
2.我用了CurveExpert做标曲，自动搜索后发现有10种提供的方程，各种形式的，其中一个十分适合我的实验结果（LogisticModel），而其他的感觉又不适合，因为结果常常为负值。这又是为啥捏？
3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4，如果我的测量结果在1.3，是否像其他人所说的＞1了就不准确了。
4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程？
不好意思啊，一下问了这么多问题，最近做了一个月的ELISA，完全摸不清头脑啊。谢谢各位了
下图为ELISA原理图，夹心法即Sandwich ELISA，竞争法就是Competitive ELISA
向左转|向右转
ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒 IgM抗体.
大家好,我在做双抗夹心法的elisa实验,已经花了20来天了，然而标准曲线的线性一直做不好，而且不稳定。下面我把具体的实验过程说下，希望大家能给我提个建议，谢谢！
首先我从以下数据中确定了标准品的起始稀释浓度:4.64,46.4,464,4640IU/ml对应的OD为0.55,1.178,1.086,1.168.因此我取46.4IU/ml(300ng/ml)作为标品的起始稀释浓度。然后作了关于单抗，多抗，二抗的合适稀释度的实验，我的数据如下：
123456789
空白0.2290.1920.2120.1540.1390.1730.2360.1770.257
46.4iu/ml1.2421.5271.2691.9641.6281.9592.0051.8802.163
9.28iu/ml0.9680.9501.0131.1360.8731.2461.6971.5861.769
阴性0.1920.1760.2500.1310.1610.1540.1990.2190.244
选取了7号组合单抗，多抗，二抗分别为1ug/ml,1ug/ml,0.5ug/ml。
标品按照以下梯度稀释：46.423.211.65.82.91.450.725iu/ml.以下是我近来做的三组数据,都是相对空白的相对值：
123
46.4iu/ml0.6130.5860.851
23.20.5240.6490.765
11.60.3820.510.663
5.80.3160.3850.567
2.90.2880.3190.37
1.450.2890.1340.303
0.7250.1210.1460.113
空白0.0820.0870.101
阴性0.0820.1050.101
似乎梯度都不明显。我现在疑惑的是我的标品浓度的设置有问题还是之前抗体的浓度选择不合适，请大家多指点，万分感谢！！！
