UE-H9043◆金牌胎牛血清的胎牛检测过那些病毒？BVDV、PI3、BAV-3、BPV、REO3、Rabies◆如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。注意融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，若存放于4℃时，请勿超过一个月。长期保存推荐在-20℃以下，若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻，并避免反复冻融。◆有时在血清中见到的絮状沉淀可能是些什么物质？主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量，可用400 xg离心5 min去除，也可不用处理。◆如何避免血清中产生沉淀?(1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。(2) 血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。(4) 勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。(6) 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。◆为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，肥大细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。◆细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;(2)血清质量不好，反复冻融的结果;(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;(5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。◆细胞培养中如何防止黑点生成?(1) 尽可能地减少血清冻融次数。(2) 培养基无需37℃水浴。(3) 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。(4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。(5) 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。
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Nutrients.2017May10;9(5).
ClinicalSignificanceandPrognosticEffectofSerum25-hydroxyvitaminDConcentrationsinCriticalandSevereHand,FootandMouthDisease.
手足口病危重儿血清25-羟维生素D浓度的临床意义与预后影响
作者党红星，刘成军，李静，程时骄，许峰
摘要
Abstract
目的：探讨血清25羟维生素D[25（OH)D]浓度与手足口病危重症的关系及评估手足口病危重儿血清25-羟维生素D浓度的临床意义与预后影响。
OBJECTIVE:
Toexaminetheassociationofserum25-hydroxyvitaminD[25(OH)D]concentrationswithcriticalandseverehand,footandmouthdisease(HFMD)andassesstheclinicalsignificanceandprognosticeffectof25(OH)DconcentrationsinchildrenwithHFMD.
方法：本研究为前瞻性观察研究。
METHODS:
ThisisaProspectiveobservationalstudy.
将138例手足口病患儿分为普通组（49例）、重症组（52例）和危重组（37例）。另选取同期门诊体检的59例健康儿童作为对照组。
The138childrenwithHFMDweredividedintocommon(49cases),severe(52cases),andcritical(37cases)HFMDgroups.Another59healthychildrenundergoingoutpatientmedicalexaminationsduringthesameperiodwerechosenasthecontrolgroup.
测定所有对象的血清25（OH）D浓度，每组再分为血清25（OH）D正常组（≥30ng/mL）；不足组（20-29.9ng/mL）；缺乏组（低于20ng/mL）。
Serum25(OH)Dconcentrationsweremeasuredinallthesubjects,andeachgroupwassuBDividedbyserum25(OH)Dconcentrationinto25(OH)Dnormal(≥30ng/mL);insufficiency(20-29.9ng/mL),anddeficiency(<20ng/mL)groups.
手足口病危急重症组在入住儿科ICU（PICU）时记录小儿危重病例评分（PCIS）。
Thepediatriccriticalillnessscore(PCIS)wasrecordedforthecriticalandsevereHFMDgroupuponadmissiontothepediatricintensivecareunit(PICU).
监测小儿危重手足口病患者血乳酸（LAC）、血清钙离子（Ca2+）、D-二聚体（DD）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平；脑干脑炎、神经源性肺水肿、循环衰竭的发生情况；14天病死率。
ChildrenwithcriticalandsevereHFMDwerealsomonitoredforbloodlactate(LAC),serumcalciumions(Ca++),D-dimer(DD),lactatedehydrogenase(LDH),andcreatinekinase-MB(CK-MB)levels;theincidencesofbrainstemencephalitis,neurogenicpulmonaryedema,andcirculatoryfailure;andthe14-daymortalityrate.
结果：
RESULTS：
各组血清25（OH）D浓度普遍较低。
Serum25(OH)Dconcentrationsweregenerallylowinallgroups.
与对照组（28.1±6.6ng/mL,8%）、普通组（29.5±8.1ng/mL,10%）和重症组（31.9±9.7ng/mL,8%）相比，危重组患者血清25（OH）D平均浓度（20.0±8.4ng/mL）明显较低，血清25（OH）D缺乏比例（18％）明显较高(P＜0.05）。
ThecriticalHFMDgroupshowedasignificantlylowerserum25(OH)Dmeanconcentration(20.0±8.4ng/mL)andahigherproportionofdeficiency(18%)comparedwiththecontrolgroup(28.1±6.6ng/mL,8%),common(29.5±8.1ng/mL,10%)andsevere(31.9±9.7ng/mL,8%)HFMDgroups(p<0.05).
在危重组中，25（OH）D缺乏组比25（OH）D正常组及不足组具有更低的PCIS值（P＜0.05）；而比后两组具有更高LAC、LDH、CK-MB和DD；具有（更高的）脑干脑炎、神经源性肺水肿、循环衰竭发生率及病死率（P＜0.05）。
InthecriticalandsevereHFMDgroups,the25(OH)DdeficiencygrouphadlowerPCISsthanthe25(OH)Dnormalandinsufficiencygroups(p<0.05);andhadhighervaluesthanthelattertwogroupsforLAC,LDH,CK-MBandDD;andtheincidencesofbrainstemencephalitis,neurogenicpulmonaryedema,circulatoryfailure,andmortality(p<0.05).
死亡组较存活组具有显著降低的血清25（OH）D浓度和PCIS（P＜0.05），具有较高的LAC、LDH、CK-MB和DD水平；较高的脑干脑炎、神经源性肺水肿、循环衰竭发病率（P＜0.05）。
Thedeathgroupshowedsignificantlylowerserum25(OH)DconcentrationsandPCISsthanthesurvivalgroup(p<0.05)andhadhigherLAC,LDH,CK-MBandDDlevelsandhigherincidencesofbrainstemencephalitis,neurogenicpulmonaryedema,andcirculatoryfailure(p<0.05).
Logistic回归分析显示，血清25（OH）D浓度是影响重症手足口病患儿病死率的独立因素。
Logisticregressionanalysisrevealedthattheserum25(OH)DconcentrationwasanindependentfactorthatinfluencedmortalityinchildrenwithcriticalandsevereHFMD.
CONCLUSIONS:
结论：
在这项研究中，我们发现，血清25（OH）D浓度在手足口病危重患儿中大幅降低，并与手足口病的严重程度相关。
Inthisstudy,wefindtheserum25(OH)DconcentrationsaresubstantiallyreducedinchildrenwithcriticalandsevereHFMDandareassociatedwiththeseverityofHFMD.
血清25（OH）D浓度对判断重症手足口病进展和预测死亡风险具有临床价值。
Theserum25(OH)DconcentrationsmayhaveclinicalvaluefordeterminingtheprogressionofcriticalHFMDandpredictingtheriskofdeath.
在确定25（OH）D浓度在手足口病诊断的临床价值之前，仍需进一步的证据。
Furtherevidenceisneededbeforeitcanbestatedthat25(OH)DconcentrationshaveclinicalvalueinHMFDdiagnosis.
关键词：
KEYWORDS:
25-hydroxyvitaminD;criticalillness;footandmouthdisease;hand
25羟维生素D；危重病；手足口病
碳酸氢钠溶液是一种co2缓冲液,当瓶内二氧化碳量减少时,碳酸氢钠溶液释放co2,反之吸收co2.因此它能保持瓶内二氧化碳量大致不变.
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本人科研小白，研究新生！
课题准备检测血清中骨桥蛋白（OPN）含量
现在计划是先将所有血标本离心取血清先冻存，待所有标本收集齐后再统一做
大概要收集2个月，约70个病例。
现在我的问题就是：1、离心后的血清，如何分装、冻存？（具体条件、流程、用什么管子冻存，是否需要买冻存液等）
2、冻存后如何复苏？（最好有具体流程，具体复苏条件，是否需要买什么复苏液、培养基什么的）
刚来读书，一下子拿到这个题目有点懵，网上搜了一些，比较杂，比较乱，没有底，想请教各位哥哥姐姐给我提供点帮助，先谢谢了！
在生活中，不少人认为抗生素是退烧药而随便使用，这是一种误区。其实不是所有的发热都是由细菌感染引起的，常见的伤风感冒通常由病毒所致，也发热，用抗生素毫无用处。而服用一般解热镇痛药大多可以奏效。患了病毒性感冒后，应到医院诊疗，只要加强护理，适当休息，多喝开水，给予易消化的饮食，通常会很快恢复健康。
俗话说，“是药三分毒”。滥用抗生素危害就更大了。首先，它会诱发细菌耐药。病原微生物为逃避药物，在不断地变异，耐药菌株也随之产生。目前，几乎没有一种抗菌药不存在耐药现象；其次，它会损害人体器官。抗菌药在杀菌的同时，也会造成人体损害，如影响肝、肾脏功能、胃肠道反应及引起再生障碍性贫血等；再次，它还会导致二重感染。在正常情况下，人体的口腔、呼吸道、肠道都有细菌寄生，寄殖菌群在互相拮抗下维持着平衡状态。如果长期使用抗菌药，敏感菌会被杀灭，而不敏感菌乘机繁殖，未被抑制的细菌、真菌及外来菌也可乘虚而入，诱发又一次感染。
是否使用抗生素治疗，首先应去医院做个血常规化验，查一下白细胞情况，搞清感冒的性质。如果是病毒性感冒，使用抗生素毫无用处，应使用抗病毒药物；如果感冒症状是由细菌感染造成的，则需使用抗生素。病人可根据感冒的症状进行自我初步判断：体温不高，痰是白色的，鼻水是清的，一般可初步判断为病毒性感冒；痰是黄色的，则可能是细菌感染。
小孩感冒应先到医院做血常规检查，确诊是病毒感冒还是细菌感染。如病毒感冒不需用抗生素治疗，如果是细菌感染，应在医生指导下选择适合儿童用的相对安全的抗生素治疗，如：青霉素类、头孢类抗生素。需要特别提醒的是，氨基糖苷类抗生素一定要慎用，因为它有耳毒性，有造成儿童耳聋的风险。
阅读抗生素的药物说明书时应重点关注适应证、用法、用量等细节。小儿用药剂量和大人不同，而有的家长不按说明服药，拿成人用的药量给孩子服用，以为只要对症就能治病。殊不知，有些抗生素对骨骼发育会产生抑制作用，成人可用，但孩子万万吃不得。需要特别提醒的是，儿童颗粒剂抗生素要用温开水调服，因为抗生素的稳定性不高，水温太热会影响药效。同时要避免用牛奶、饮料等服药。另外，患者在服用头孢类抗生素期间及治疗结束后72小时内（三天）应避免摄入含酒精的饮料，否则会引起戒酒硫样反应，人会有醉酒的感觉。还要避免吃奶酪，因为奶酪中有酪氨酸，会与药物发生反应。
做ELISA实验，在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
【标本收集注意事项】
1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血，高血脂标本。
3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃电冰箱内，避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。
6.收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程。
7.收集标本时，应该做好防护措施（比如戴手套，口罩，护目镜等），认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面，并且正确使用生物安全柜。
样本正确的处理方法应该是这样的：
【标本处理办法】
1.血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
2.血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离
心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）
保存。
3.组织匀浆：切取组织块，0.01MPBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
4.细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
5.尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃3-6个月）保存。
注：样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
希望可以给您提供帮助，祝您科研顺利！
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