储存条件-20℃ 避光保存,有效期见外包装。 产品介绍 DiI 即 DiIC18(3),全称为 1,1"-dioctadecyl-3,3,3",3"tetra- methylindocarbocyanine perchlorate,是最常用的细胞膜荧光探针之一,呈现橙红色荧光。DiI 是一种亲脂性膜染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐染色整个细胞的细胞膜。DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。常与 DiA 一起用于细胞膜双色标记。 DiI 作为示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer),可以被广泛用于正向或逆向、活的或固定的神经等细胞或组织。DiI 通常不会影响细胞的生存力(viability)。被 DiI 标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达 4 周,在体内可以长达一年。DiI 在被固定的神经元细胞膜上的迁移速率为0.2-0.6 mm/day,在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为 6 mm/day。 DiI 除了用于细胞膜荧光标记外,还可用于检测细胞的融合和粘附、发育或移植过程中细胞的迁移,通过 FRAP(光脱色荧光恢复技术)检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。 DiI 染色后可进行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他试剂)的固定,但不建议在染色后进行透化的过程。此外,在固定透化(室温下用 0.1% TritonX-100 透化)后,也可以很好地进行质膜染色。注意事项 1. DiI 染色固定的细胞或组织样品时,样品宜使用配制在PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。 2. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
先用DiI对细胞膜进行染色,后用DAPI染核◆DiI细胞膜染料,除了在549nm下有红光外,在488nm下有绿色吗?该染料在488nm激发处,有微弱的激发,如果染料浓度太大或者曝光太强的话,会在488nm处有微弱的荧光,建议调整曝光和染料浓度◆DiI也可以染色细胞内的细胞器膜吗?可以,因为DiI染色细胞膜是非特异性的,所以细胞器的膜也会被染上色,如果不想细胞器染色太明显,可以减少孵育时间或者将染料浓度降低◆细胞追踪有很多产品,该如何选择?首先确定追踪细胞的时间,然后考虑染料结合机制。1.钙黄绿素染料(C4041)标记均匀且对短期细胞迁移示踪效果极佳,但也会被某些类型细胞迅速外排。2.亲脂性的花青素染料,如DiI(D4010),DIO(D4007),DiA(D4059),DiD(D4019),DiR(D4006)能标记细胞膜而不破坏其功能,并且能持续更长时间,但如果发生膜融合则可能会染上其他细胞。此外,它们还会在透化过程中丢失。3.CellTracker染料(C4060)更有利于长期标记,其带有温和的氯甲基反应基团使之能够与细胞组分共价结合。4.CFDA SE(C4070)也能共价地结合于细胞组分。在所有列出的试剂中,细胞内保留与否取决于细胞分裂的速率和细胞的固有特性(主动外排,膜和蛋白质的周转率等)。其中共价结合试剂比非共价结合的试剂展现出更长的保留时间
2.Nanoparticles Targeted against Cryptococcal Pneumonia by Interactions between Chitosan and Its Peptide Ligand
- Yixuan Tang ,
- Shuang Wu ,
- Jiaqi Lin ,
- Liting Cheng ,
- Jing Zhou ,
- Jing Xie ,
- Kexin Huang ,
- Xiaoyou Wang ,
- Yang Yu ,
- Zhangbao Chen ,
- Guojian Liao ,and
- Chong Li*
- Nano Letters
2.Iontophoretic dye labeling of embryonic cells应用方向:细胞迁移
3.Dilation of the inflUEnza hemagglutinin fusion pore revealed by the kinetics of individual cell-cell fusion events应用方向:细胞融合
4.Alcohol inhibits cell-cell adhesion mediated by human L1应用方向:细胞粘附
5.Analysis of simulated and experimental fluorescence recovery after photobleaching. Data for two diffusing components
应用方向:FRAP检测脂在细胞膜上的扩散
6.Standardization of a flow cytometric method for measurement of low-density lipoprotein receptor activity on blood mononuclear cells
应用方向:标记脂蛋白
7.Plasma Exosomes Spread and Cluster Around β-Amyloid PlaqUEs in an Animal Model of Alzheimer’s Disease.应用方向:DiI标记外泌体,注射入小鼠海马齿状回(DG)区,观察外泌体在皮质层的迁移
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请教各位前辈:流式细胞分析技术检测细胞周期和细胞凋亡的变化,是不是一般都是用AnnexinV-PI试剂的?据说这个比较贵是吗?有其他的可以代替吗?
1 mmol/LEDTA(pH 8.0)
因为含有以上两种物质,所以称为TE。
配制分三步:
1)1 M Tris-HCl (pH 8.0) 50 ml的配制:称取Tris碱6.06 g,加超纯水40 ml溶解,滴加浓HCl约2.1 ml调pH至8.0,定容至50 ml。
2)0.5 M EDTA(pH 8.0)50 ml的配制:称取EDTA-Na2·2H2O 9.306 g,加超纯水35 ml,剧烈搅拌,用约1 g NaOH颗粒调pH至8.0,定容至50 ml。(EDTA二钠盐需加入NaOH将pH调至接近8.0时,才会溶解。)
3)1×TE(10 mM Tris-HCl,pH 8.0;1 mM EDTA,pH 8.0)的配制:
作用:
TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存. 10mMTris-Hcl,pH有7.47.68.0三种。
EDTA调到8.0是为了更好溶解,其他只要调到相应pH就可以。Tris在7-8附近缓冲能力很强,所以加8.0的EDTA下去后,不会改变pH。
然后你得确定,这个细胞株对于你得研究来说不可或缺,具有明确的代表性。
上面两个都没有问题的话,祝你顺利。
我的步骤:
1、16-22天小鼠颈椎脱臼法处死后,75%酒精浸泡30秒消毒,睾丸取出后置预冷PBS,40分钟(路上所需时间)后开始处理。
2、剔除白膜,剪碎睾丸。0.25%胰酶(含edta)1.5ml/个睾丸37°C消化30-50分钟,等体积DMEM/F12含10%FBS终止消化,1000r/MIN离心5分钟,弃上液。
3、加0.1%胶原酶消化30分钟,过200目网筛,1000r/MIN离心5分钟,弃上液。
4、DMEM/F12含10%FBS5ml重悬后转如培养瓶,入孵育箱37°C5%CO2培养。
请教各位,我到底是哪里有问题,是胰酶消化的时间长了吗?
请大神前辈指点指点,已经研三了,实验很不顺利,再这样都要延期的节奏了。请问最近急性分离出来的大鼠心肌细胞很不耐钙,做膜片钳封接不上可能是什么原因造成的?谢谢了!
生物工程的应用领域非常广泛,包括农业、工业、医学、药物学、能源、环保、冶金、化工原料等。它必将对人类社会的政治、经济、军事和生活等方面产生巨大的影响,为世界面临的资源、环境和人类健康等问题的解决提供美好的前景。展开
细胞株(cell strain) 是通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。一般认为,细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
细胞系(cell line) 是原代细胞经首次传代成功后即为细胞系。泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系,不能连续培养的称为有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代,或传代次数有限, 可称为有限细胞系(finite cell line), 如可以连续培养, 则称为连续细胞系(continuous cell line), 培养50代以上并无限培养下去。人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。
2.关键还是生长因子等的浓度;
3.如果需要的话,需要明胶包被.
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