如何让蛋白质从去垢剂中释放

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如何让蛋白质从去垢剂中释放

2017-10-02

问题描述：

去垢剂分离膜蛋白，最后是如何释放蛋白质而得到蛋白质的呢？

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FeiHong飞鸿40

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答：蛋白质失活的原因是去垢剂中的表面活性剂能够通过包含蛋白质的半透膜,而其强碱性离子能够使蛋白质变性.去垢剂(表面活性剂)是一类即具有亲水基又具有疏水基的物质,一般具有乳化、分散、和增溶作用,可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型,中性去垢剂在蛋白提取钟应用的较多.A．中性去垢剂又称非离子表面活性剂,对蛋白质的变性作用影响较少,宜于蛋白质或酶提取之用.一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类,如PEG200；多元醇类表面活性剂,如山梨醇、司盘类和吐温类；聚氧乙烯脂肪醇醚,如苄泽类、平平加类；聚氧乙烯烷基苯酚醚,如Igepal CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌.中性去垢剂作用后可通过Sephadex LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱层析分离目的蛋白,不必先除去去垢剂.B．阴离子去垢剂常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠.前者可促进核蛋白的溶解,将核酸释放出来,并对核酸酶有一定抑制作用,常用于核酸的提取.C．阳离子去垢剂如洁尔灭、新洁尔灭、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒净（TMPB）、杜灭芬等,消毒灭菌类居多.D．天然表面活性剂又称为生物表面活性剂,包括种类较为广泛,如各种树胶（阿拉伯胶、杏胶、桃胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、胆甾醇、胆酸类、多糖类（如环糊精）等.E．两性表面活性剂在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质,起泡性好,去污力也强；在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征,其杀菌性很强.蛋白质变性剂的作用是破坏蛋白质的次级键,如氢键、盐键和疏水力,引起天然构象的解体；它们并不破坏共价键,如肽键和二硫键,故不涉及一级结构的改变.变性剂有溶解型和沉淀型两类,SDS、尿素和胍盐是有效的溶解型变性剂,而三氯乙酸、甲醇、和氯仿/异戊醇是有效的沉淀变性剂.一般而言,变性剂应用时常大大过量,破坏氢键的变性剂用量至少两倍于氨基酸的克分子数,如1克蛋白质可可结合1.4g.SDS溶于水可达25%,对温度敏感,W/V贮存液最为方便.需要注意的是SDS的钾盐是不溶性的,所以SDS溶液中要避免混入钾盐.尿素极易溶于水,可达10mol/L,在8mol/L以上要注意温度以防止沉淀.尿素在水中缓慢分解形成氨及高度活性的氰酸离子,故要防止高温.三氯乙酸与过氯酸（TCA,PCA）都是极好的沉淀剂,能沉淀蛋白质和核酸,前者应用更为广泛.

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