【求助】奇怪...WB大分子蛋白能显影，内参等分子量稍小的却不行~请教原因
2021-07-21
问题描述：
本人最近在做WB时遇到一个奇怪的问题
我要做的两个目的蛋白，分子量一个是140的，另一个是36，内参用的GAPDH。这几天刚刚要做小鼠组织的蛋白，就把新提取的组织蛋白和之前做过的细胞蛋白一起上了，细胞和组织的各上了3个孔。
电泳转膜孵育等条件都是以前做成熟的
之后显影，细胞蛋白的，两个目的和内参都出得挺好；但是小鼠的组织蛋白只有分子量140的那个显出条带了，36的那个显出来的像一片水渍一样，斑片状的黑，内参有时也这样、有时干脆什么都不显。不知道这是什么原因...按说细胞同样的蛋白做出来，WB的各个步骤应该不会有太大问题的。
有点怀疑蛋白提取的不好，我提组织蛋白的的操作是在冰上进行的，裂解液也加有PMSF，用BCA法测得的蛋白浓度大概也有3~5mg/ml。
在这里求助各位高手~望给我指点一下~不胜感激啊！
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13579yyy1
用户
你的裂解液里面用的是什么去垢剂啊？
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13579yyy1
用户另外根据我不多的经验，不推荐用GAPDH做内参，这个蛋白经常出现一些奇怪的问题。还是使用actin或者tubulin
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tangzq
用户13579yyy1另外根据我不多的经验，不推荐用GAPDH做内参，这个蛋白经常出现一些奇怪的问题。还是使用actin或者tubulin非常感谢您的提示~回头我再试试~
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嗨a静香
用户你的膜是多少孔径的？推荐0.22um
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