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单克隆抗体上清的制备实验一基本方案1
来自 : 蚂蚁淘
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 将杂文瘤置于一个盛有完全DMEM-10培养基的175cm2组织培养瓶中,置37℃CO2培养箱中,直至生长旺盛适于分传。

2. 按1:10的比例将细胞分传到一个新的175cm2的培养瓶中,加入完全DMEM-10培养液到总液量为100ml,并置CO2培养箱中直至细胞过度生长,此时溶液变酸(变黄色),细胞死亡(约5天)。 

3. 将培养瓶中的内容物转移到无菌的50ml的锥形离心管中,室温下1500g离心10min,收集上清,弃沉淀。

4. 用ELISA法或用流式细胞仪检测MAb上清的滴度。

5. 将上清无菌保存,在4℃时通常可稳定地存放数周至数月;在-20℃时可存放数月至数年;-70℃时可永久保存。分装成数份冻存,尽量避免反复冻融。
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