哺乳动物细胞基因稳定转染的实验一基本方案
| 实验材料 | 哺乳动物细胞 试剂、试剂盒 | 完全培养液 仪器、耗材 | 培养箱离心管 实验步骤 | 1. 确定所要转染的细抱系能呈独立集落生长。对于贴壁细胞，在10cm组织培养培养皿中接种约100个细胞，培养10~12天，毎4天换液1次。亚甲蓝染色后对成活的细胞集落进行计数。 2. 确定母代细胞的选择条件：将一培养皿上生长汇片的细胞按不小于1：15的比例分传于含有不同药物浓度的培养液中。培养10天。用合适的选择培养液每4天换液1次，并检查活细胞。 3. 确定转染母代细胞的最有效的方法。可选用磷酸钙或电穿孔方法。对于磷酸钙转染，在加DNA的前1天，将母代细胞按1：15分传中完全培养液中。 4. 用目的基因转染母代细胞，含目的基因的质粒与含标记基因的质粒的摩尔比例不小于5：1。用担体DNA替代含有目的基因的质粒作为对照，分别进行几次转染。 5. 在无选择条件下让细胞倍增2次。将细胞按1：15分传于选择培养液中。 6. 在选择培养液中接种5个以上培养皿，以得到尽可能多的能挑取和扩增成细胞系的细胞集落数，每4天用选择培养液换液，培养10~12天，将培养皿对着光成一角度观察其中的细胞克隆，其中的一只培养皿直可进行染色以便于计算细胞集落数。挑取大的、生长良好的细胞集落。 注意事项 | 如果用5：1的比例，没有必要在转染前将透择标记基因与目的基因连接起来：如果选择需要用大量的选择性质粒，有时无态保证5：1比例，故要将选择标记基因及所要研究的目的基因构建在同一个质粒中。如果用含有所研究的基因进行转染没有形成克隆，而在含有的对照中却可产生究隆，则所研究的基因能有细胞毒性。 |
|---|
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-07
阅读（249）
▍
相关分类
▍
相关文章
淋巴细胞增殖功能的测定实验 实验方法
微生物期末考试题目及答案
水泡性口炎病毒G 蛋白结合物实验 实验方法
过氧化氢酶活力的测定实验报告doc
实验动物家兔的静脉麻醉
[word doc]基于碳纳米管的脂质体电化学发光免疫传感器检测人免疫...
水环式真空泵/液环真空泵工作原理演示_真空技术网
ChemImpex International代理品牌:Chem...
Novel Zebrafish Monoα2,8sialyltransferase (ST8Sia VIII...
Synchronizing Worm Cultures 线虫实验 资讯
【求助】用于提蛋白做western的细胞能在20度先保存么 蛋白质和...
中国人基因组YAC文库的构建及其应用初探
▍
相关问答
