酶切反应条件如下：在20µlPCR产物混合体系中加入5U的内切酶，按相应的反应温度温育1小时。通常20µlPCR产物体系中含有1µg底物DNA，1单位的VentDNA聚合酶，1×ThermoPolBuffer[10mMKCl，20mMTris-HCl（PH8.8@25°C），10mM(NH4)2SO4,2mMMgSO4和0.1%TritonX-100]，以及终浓度为200µM的dNTPs。表中标记有*的内切酶在酶切反应前需加入NaCl（终浓度为100mM）或相应的10×NEBuffer（1×终浓度）。 注意：在非最佳条件下进行酶切反应容易出现星号活性。要避免星号活性或希望取得更好的酶切效果，则需用乙醇沉淀纯化DNA，再将其溶解于相应的酶切缓冲液。此外，如果使用不纯的DNA聚合酶，会因其中混有其它核酸酶而影响整个反应结果。 +++表示完全切割；++表示约50%被完全切割；+表示约25%被完全切割。酶 AATII +++ AccI + Acc65I ++ AciI +++ AclI ++ AflII +++ AflIII ++ AgeI +++ AhdI ++ AluI +++ AlwI ++ AlwNI ++ ApaI +++ ApaLI +++ ApoI ++ AscI +++ AseI + AvaI +++ AvaII ++ AvrII +++ BaeI none BamHI BanI +++ BanII +++ BbsI +++ BbvI ++ BcgI ++ BciVI ++ BclI +++ BfaI none BglI + BglII +++ BlpI +++ BmrI BpmI ++ BsaI + BsaAI +++ BsaBI ++ BsaHI +++ BsaJI +++ BsaWI ++ BseRI +++ BsgI ++ BsiEI ++ BsiHKAI* ++ BsiWI ++ BslI ++ BsmI +++ BsmBI ++ BsmFI ++ BsoBI +++ Bsp1286I +++ BspDI ++ BspEI* +++ BspHI ++ BspMI none BsrI +++ BsrBI +++ BsrDI ++ BsrFI ++ BsrGI ++ BssHII ++ BssKI ++ BssSI +++ BstBI +++ BstEI +++ BstNI ++ BstUI ++ BstXI +++ BstYI ++ BstZ17I ++ Bsu36I +++ BtgI BtsI Cac8I +++ ClaI ++ DdeI +++ DpnI (none,requiresmethylatedsubstrate) DpnII +++ DraI ++ DraIII* +++ DrdI ++ EaeI +++ EagI + EarI +++ EcoNI ++ EcoO109I +++ EcoRI ++ EcoRV +++ Fnu4HI +++ FokI none FseI +++ FspI ++ HaeII +++ HaeIII +++ HgaI +++ HhaI ++ HincII ++ HindIII +++ HinfI ++ HinP1I +++ HpaI +++ HpaII +++ HphI +++ KasI +++ KpnI +++ MboI ++ MboII +++ MfeI ++ MluI ++ MlyI MnlI +++ MscI ++ MseI ++ MslI +++ MspI +++ MspA1I +++ MwoI ++ NaeI + NarI ++ NciI ++ NcoI +++ NdeI ++ NgoMIV ++ NheI ++ NlaIII +++ NlaIV +++ NotI +++ NruI ++ NsiI +++ NspI PaeR7I ++ PflFI ++ PflMI ++ PleI ++ PmeI ++ PmlI ++ PpuMI ++ PshAI ++ PspGI PstI +++ PvuI ++ PvuII +++ RsaI +++ RsrII ++ SacI ++ SacII +++ SalI* + SapI ++ Sau3AI +++ Sau96I ++ ScaI ++ ScrFI +++ SexAI SfaNI ++ SfcI +++ SfiI +++ SfoI SgrAI SmaI ++ SmlI +++ SnaBI ++ SpeI +++ SphI +++ SspI ++ StuI ++ StyI ++ SwaI TaqI ++ TfiI +++ TliI TseI +++ Tsp45I +++ Tsp509I +++ TspRI ++ Tth111I ++ XbaI +++ XcmI +++ XhoI ++ XmaI ++ XmnI +++
