百万火急,重组质粒酶切只有一条带,测序显示目的基因已连在载体上,菌落PCR也可以P出目的条带,为什么双酶切只有一条带!!!!
2021-07-28
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mpark
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Is the construct maxiprep sequenced? If it is, have you tried sequencing using primers the nucleotide sequence of which is derived from the insert DNA?
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dxy_20y4ry49
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试过的,分别涉及两对引物,一对在插入的目的基因上,一对在载体上,做质粒PCR都可以P的出目的条带,但是再做双酶切,都只有一条带。
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mpark
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Canyoufindthetwoenzymesitesinthesequencedata?
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木木夕7
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是不是连接后没有酶切位点?我之前做的单酶切,连接目的基因后,又做的酶切,通过没有酶切成线性质粒,证明我的目的基因连接上了。跟你的思路完全相反。仅供参考。
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H梦Z
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会不会是其中一个酶切位点发生了突变或者甲基化导致切不下来?
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dxy_20y4ry49
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重新连接后的目的序列,经测序分析,双酶切位点都还在的。谢谢各位,已找到原因。
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dxy_anip0c62
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您好,我是新手,最近遇到了与你一样的问题,请问你是怎样找到问题所在的呢??
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