DNA amplification made possible with a TwistAmp® Basic kit. Contains all the enzymes and reagents necessary for the amplification of DNA,the user needs only supply primers and template. Even PCR primers can work using TwistAmp® Basic. TwistAmp® Basic has been used for solid-phase, tailed primers, aptamers, electrochemistry and microarray applications. See manual for more information. Click to order oligonucleotides.
Perfect for: End-point gel electrophoresis DNA detection, down-stream applications (e.g. sub-cloning)
Product code: TABAS03KIT
Product manual: TwistAmp Basic Kit Quick Guide (INTABAS)
英国TwistDx公司成立于1999年，是基于英国剑桥Babraham研究院建立的生物技术公司。该公司通过突破等温DNA扩增，开发的重组酶聚合酶扩增专利技术（RPA），被誉为DNA诊断领域的革命性创新。核心产品：产品名称货号描述检测方法TwistAmp®BasicTABAS03KIT用于DNA快速扩增终点凝胶电泳DNA检测，下游应用（如：亚克隆）TwistAmp®exoTAEXO02KIT实时荧光DNA扩增实时荧光DNA检测TwistAmp®LiquidBasicTALQBAS01液体形式DNA快速扩增终点凝胶电泳DNA检测，下游应用（如：亚克隆）TwistAmp®LiquidexoTALQEXO01液体形式实时荧光DNA扩增实时荧光DNA检测TwistAmp®nfoTANFO02KIT测流层析检测DNA扩增侧流层析试纸条检测应用：TwistDx公司开发的重组酶聚合酶扩增（RPA），被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。以此为基础的TwistAmp 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、工业应用，食品检测，农业，公共卫生，生物安全和环境感知等相关领域。RPA反应的最适温度在37℃~42℃之间，无需变性，常温下即可反应，大大加快了PCR的速度。并且由于不需要温控设备，RPA可以真正实现便携式的快速核酸检测。RPA检测的灵敏度很高，能够将痕量的核酸（尤其是DNA）模板扩增到可检出水平，从单个模板分子得到大约1012扩增产物。无需复杂样品处理，即可实地检测；既可扩增DNA也可扩增RNA，省去额外的CDNA合成步骤；检测方式多样：终点检测、对扩增过程进行实时监控或通过侧流层析试纸条（LFD）读取结果。
英国TwistDx公司（前身为ASM科技有限公司）成立于1999年，基于英国剑桥Babraham研究院建立的生物技术公司。该公司通过突破等温DNA扩增，开发的重组酶聚合酶扩增专利技术（RPA），被誉为DNA诊断领域的革命性创新。TwistDx以此技术为基础生产的核酸扩增类产品，能在恒定且较低的温度下，仅用10~20分钟，进行单分子核酸检测。这一技术对环境、硬件设施的要求很低，对于生物防护、水体检验、食品检验、医疗诊断、微流体、兽医等方面都有良好的应用。RPA扩增的各种体系试剂盒中，含有DNA、RNA扩增所需的所有试剂，研究者只要准备好引物和模板就行了。扩增结果可以分别通过凝胶电泳检测、荧光定量检测或试纸条检测，产物纯化后可用于下游研究。苏州蚂蚁淘生物科技有限公司是最早将英国TwistDx公司PRA技术和产品引入中国的经销商，与TwistDx公司建立了长期的战略合作关系，请将长期致力于PRA技术在中国的推广！接TwistDx厂家通知：工厂搬迁完成，自10月15日起可正常下单订货，感谢各位新老客户多多支持！最新产 品列表：TABAS03KIT-TwistAmp?BasicKitTAEXO02KIT-TwistAmp?exoKitTANFO02KIT-TwistAmp?nfoKitTALQBAS01-TwistAmp?LiquidBasicKitTALQEXO01-TwistAmp?LiquidexoKitUSTAR01-U-Starcassette(packof20)MILENIA01-MileniaHybritech1(packof100)
TwistDx全新的液态重组酶聚合酶扩增(RPA)试剂盒，这些试剂盒非常适合需要不使用热循环仪就能在15分钟内完成DNA/RNA扩增的实验室以及想要灵活构建试验体系的研究人员使用。TwistAmp® Liquid试剂盒提供经甘油稳定化处理的液态RPA试剂，该形态对于在实验室执行PCR和其他基于酶的反应的任何人来说都非常熟悉。这些试剂各自装于单独的试管中，用户可随意从中移取任何量的酶混合液来构建自己所选的RPA反应体积，配制用于多次反应的预混液，或者以各种RPA组分比例进行实验以优化试验。除了具有室温稳定性的冻干态TwistAmp®RPA试剂盒这一旗舰产品，本次新推出的 TwistAmp®Liquid试剂盒是现场或定点试验开发的理想之选。液体形态让实验室更容易地在日常工作中使用快速简单的RPA法（该方法有时甚至采用与PCR相同的引物）取代PCR法，以及更容易地开发出定制的试验。
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核酸扩增是核酸分子诊断的关键技术。根据核酸扩增反应中温度变化要求，可以将核酸扩增技术分为两大类：一类是PCR核酸扩增技术，另一类是核酸恒温扩增技术。
PCR技术是指通过控制温度的变化来实现DNA扩增的三个步骤：模板变性（如95℃）－引物杂交（如58℃）－DNA合成（如72℃）。这种温度变化的循环重复（如重复35次）过程通常由精密而复杂的仪器（PCR仪）来控制。核酸恒温扩增技术（NucleicAcidIsothermalAmplification，NAIA）则是扩增反应的全过程均在同一温度下进行，不须象PCR反应那样需要经历几十个温度变化的循环过程。这一特点使得它们对扩增所需仪器的要求大大简化，反应时间大大缩短，因而具有巨大的应用价值，成为分子诊断行业发展中的热点。
目前的NAIA技术主要有滚环扩增技术（RollingCircleAmplification，RCA）、转录酶扩增技术(TranscriptionMediatedAmplification，TMA)、依赖核酸序列扩增技术(NucleicAcidSequenceBasedAmplification，NASBA)、链置换扩增技术(stranddisplacementamplification，SDA)、环介导的等温扩增技术（Loop-MediatedIsothermalAmplification，LAMP）、解链酶扩增技术（HelicaseDependentAmplification，HDA）。上述各种核酸扩增技术均由国外公司所拥有。
交叉引物扩增技术（CrossingPrimingAmplification，CPA）是完全由优思达公司独立研发成功的一种新的核酸恒温扩增技术，也是中国首个具有自主知识产权的核酸扩增技术。CPA与优思达公司其他技术相结合(如快速核酸提取技术、核酸试纸条检测技术等)，形成一个完整的现场快速分子检测平台，可以开发出众多恒温扩增检测试剂盒，广泛应用于分子诊断、防疫检疫、生物医学研究、个体化治疗等领域。该技术已申请中国和美国发明专利，在美国《MolecularDiagnostics》等杂志发表论文二篇，并通过了比尔?盖茨基金会资助申请。
CPA扩增体系中除包含具有链置换功能的BstDNA聚合酶外，还主要包括扩增引物和两条交叉引物。这些寡聚核苷酸链能依靠BstDNA聚合酶的高活性的链置换特性，使DNA的循环扩增能不断的实现。CPA扩增主要包含以下几个步骤：
交叉正向引物CPF中的PFs与模板DNA中PFa互补，启动DNA合成，使得PRa被引入到所扩增的产物中;
外围引物DP1s与PFa前端DP1a序列互补，通过链置换型DNA聚合酶向前延伸，一边置换CPF合成的能与CPR和DP2a结合的单链产物（结构3），一边与模板DNA形成双链产物（结构2）;
在结构3中，DP2a通过链置换型DNA聚合酶向前延伸，置换出由CPR所延伸的单链产物（结构5），同时合成与步骤2中由CPF延伸所产生单链DNA形成双链产物（结构4）,而结构5相对起始的DNA模板，多了PRs和PFs两个片段序列;
单链结构5中的3’端的PFa和PRs可分别与CPF中的PFs和CPR中的PRa互补结合，可在链置换型DNA聚合酶的作用下延伸和置换出相应的单链产物。延伸产物相对结构5来说又增加了一个PFs区域（结构8）;
因此，扩增引物CPF和CPR的不断杂交和延伸，不仅使得结构5的长度不断的加长,从而引入更多CPF和CPR3’端互补区域，同时也置换出了各种可与CPF和CPR3’端互补的单链产物;
通过CPF和CPR的不断杂交延伸和DNA聚合酶的链置换作用，使得DNA拷贝数不断的增加，从而达到基因扩增的效果。
使用本装置提取临床生物样品的核酸成本低廉，只需几分钟，可以应用于现场检测或实验资源较少的基层医院和经济不发达地区；同时也可以满足大医院特定情况下的需求，如急诊或床边的核酸快速诊断。该技术已申请发明专利，并取得盖茨基金会研发资助。
CPA基本原理如下：
图2CPA扩增的反应原理图
与目前广泛使用的荧光PCR技术相比较，CPA技术有以下几个优点：
反应速度快：反应时间约1小时，使试剂盒可用于检验检疫、突发性传染病的检测与监控现场检测或医院的床边诊断（Point-of-Testing,POCT）；
检测成本低：目前荧光光定量PCR仪价格昂贵，无法在很多中小医院普及。CPA扩增只需要离心机和一台简单的恒温装置，如普通的水浴锅、金属浴，即可进行扩增。
操作简单：对操作人员的技能要求不高，绝大多数人通过简单培训或自学都可掌握，为核酸检测试剂的广泛应用创造了条件。
今天发现，我在核酸技术区开辟的“DIG/Biotin标记的Southern/Northern杂交专题讨论”4个月，今天回帖数破100，点击达1500多次。能和大家一起分享和交流，并且得到共同提高，心情很是愉快。
所以想借PCR技术区的宝地，新开辟“环介导等温扩增技术(Loop-MediatedIsothermalAmplification,LAMP)专题讨论”。我做LAMP一年多了，有些经验。而最近，和我谈起LAMP的朋友明显增多。所以在这方面大家有什么心得、体会、资料和实验困难，希望能一起交流讨论。谢谢支持！
这里所说的一个碱基的差异该怎么检测？如何理解？
1．目的
学会PCR操作的基本技术。
2．原理
是将待扩增的DNA模板加热变性，与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性，然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环，n次循环后DNA可被扩增（1+X）n倍。其中<25nt的引物退火温度Tm=2（A+T）+4（G+C）。
3．器材
旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，0.2mlPCR微量管，双面微量离心管架，PCR仪，台式离心机，琼脂糖凝胶电泳系统，水漂，恒温水浴。
4．试剂
5U/μlTaqDNA聚合酶，PCR缓冲液（10×，MgCl2free），25mMMgCl2，dNTP，引物，模板质粒pBS-CHI，无菌ddH2O。
5．实验准备
dNTP混合液（每种25mM），TAE电泳缓冲液，荧光染料，10´加样缓冲液，1.5ml离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌）。合成的引物：Senseprimer5＇-GGATCCACAATGATGAGAGCC-３＇
Antisenseprimer５＇-GATATCATGGTGAGGTAGCTAGCTT-３＇
目的基因模板质粒：已经克隆在pBS载体上的1128bp几丁质酶（chitinase，CHI）基因。
待扩增的CHI片段长度：996bp。
6．操作步骤
（1）在0.2mlPCR微量离心管中配制50μl反应体系。（以下加样量供参考，括号内是最终需要量，实验时需参照Taq酶说明书计算）
ddH2O32μl
10×PCRbuffer（不含MgCl2）5μl
25mMMgCl23μl
2.5mmol/LdNTP4μl（每种dNTP终浓度0.2mM）
10μmol/LPrimer12μl（12.5~25pmoles）
10μmol/Lprimer22μl（12.5~25pmoles）
模板质粒1μl（1×10-3pmoles）
5U/μlTaq酶1μl（5U）
总体积50μl
（2）根据厂商的操作手册设置PCR仪的循环程序：
①94℃5min
②94℃1min
③54℃1min
④72℃1min50s
⑤goto②29times
⑥72℃10min
（3）PCR结束后，取10μl产物进行琼脂糖凝胶电泳。观察胶上是否有预计的主要产物带。
（4）清理桌面，撰写实验报告。
（5）PCR产物可以直接与T载体连接（见实验五），然后转化感受态细胞（见实验八）。
7．思考
（1）复性温度如何确定？
（2）为什么要在最后延伸10min？
（3）是否有非特异性扩增产物（或引物二聚体），如何才能消除？
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