氨基酸代谢标记实验一辅助方案 TCA沉淀测定标记掺入量
| 实验方法原理 | |||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 被标记的细胞悬液（见基本方案或备择方案1～4） 试剂、试剂盒 | 0.1％（mV）BSA／0.02%（mV）NaN310%TCA溶液冷冻乙醇 仪器、耗材 | 连接真空管道的滤过装置2.5cm玻璃微纤维滤膜（WhatmanGF／C） 实验步骤 | 1.加10～20μl被标记的细胞悬液到0.1ml0.1％（m/V）BSA/0.02％（m/V）NaN3中，置于冰上。 2.加1ml冷冻的10％（m/V）TCA溶液。剧烈振荡混匀，在冰上孵育30min。 3.在真空滤过装置内，滤过细胞悬液到2.5cm玻璃微纤维滤膜上。 4.用5ml冷冻10％TCA溶液洗膜2次，再用乙醇洗2次。空气干燥30min。 5.在玻璃微纤维滤膜上点同样体积（见步骤1，10～20μl）的放射性标记的细胞悬液，在空气中干燥。 6.转移滤膜到20ml闪烁管里，加5ml闪烁记数溶液，用闪烁记数仪测定放射活性。 7.计算TCA沉淀标记（见步骤4）与总放射活性的比值（见步骤5）。 注意事项 | １.TCA有强烈腐蚀性。在制备和操作TCA溶液时注意保护眼睛并避免皮肤接触。 2.洗液应按照混合化学/放射性废弃物处理。根据安全规程进行处理。 其他 | |
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发布于 ： 2018-08-05
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