琼脂糖凝胶栓中DNA的限制性内切核酸酶消化
| 实验方法原理 | 从哺乳动物细胞、酵母或细菌分离的染色体DNA在琼脂糖栓中可用所需的内切酶消化。低熔点琼脂糖栓的孔足以使内切酶进入，与作为底物的基因组DNA相作用。消化后，经PFGE分离，然后回收或做Southern印迹分析。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 限制酶基因组DNA 试剂、试剂盒 | 限制酶缓冲液TE 仪器、耗材 | 脉冲场电泳用的凝胶水浴 实验步骤 | 一、材料 1.缓冲液和溶液 1X限制酶缓冲液 TE(pH7.6) 2.酶和缓冲液 限制酶 3.凝胶 脉冲场电泳用的凝胶 4.核酸和寡核苷酸 包埋在低熔点琼脂糖栓中的基因组DNA 5.专用设备 设定在酶切最佳温度的水浴 二、方法 1.如果凝胶栓未在TE中存放（如通过邮寄收到的凝胶栓或一直存放在0.5mol/LEDTA中的），则在50倍体积TE(pH7.6)室温温育30min。转移凝胶栓至新的50倍体积TE(pH7.6)室温温育第二个30min。否则直接进行步骤2。 2.将凝胶栓移入微离心管，每管加入10倍体积相应的1X限制酶缓冲液。室温温育30min。 3.除去缓冲液，用2~3倍体积新鲜1X限制酶缓冲液替代它。每管加入20~30单位相应限制酶该酶作用的最佳温度温育；如果是YACDNA温育3h,哺乳动物DNA温育5~6h。 4.如果DNA只用一种酶消化，消化后将凝胶栓浸入4℃20倍体积的TE(pH7.6)内。1h后按步骤7处理。如果DNA用一种以上的酶消化，则跳过TE温育而进行步骤5。 5.如果DNA用一种以上的酶消化，加入第二种酶之前再次用相应缓冲液平衡凝胶栓。为了充分平衡，使用自动移液器从每管尽可能多的除去第一个酶的缓冲液，并用1mlTE替代它。除去TE,加入新鲜的1mlTE。室温存放30~60min。轻轻除去TE。 6.每管加10倍体积第二个1x限制酶缓冲液，室温温育30min。如步骤3描述的进行限制酶消化。最后，每个凝胶栓浸入4℃20倍体积的TE(pH7.6)内1h。 7.用一次性移液器吸头将凝胶栓直接轻轻推入脉冲场凝胶的加样孔（槽）中，电泳分离DNA片段。 |
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-06
阅读（214）
▍
相关分类
▍
相关文章
欧米茄omega_卓越的标志
【求助】marker跑成这样是何原因,为何sdsPAGE下半部... 经验共...
蛋白芯片制作与应用(4)液态芯片原理 生物芯片 Labon...
一抗/二抗该选谁?
ELISA培训ppt课件
牙髓干细胞的分离培养 实验方法
分子生物学实验技术考试题库
质谱在蛋白质组学中的应用实验一方案9 蛋白质的同位素亲和标签...
braching是什么意思_braching在线翻译_英语_读音_用法_例句_海词词...
如何用LSV模型求解羊群行为？ 行为经济学与实验经济学 ...
亚摩斯(AMOS)YSH0818A养生壶隐藏式感温探头多重安全保护 单个装...
方案25.1 器官培养实验 实验方法
