| 实验方法原理 | 透析法主要用于更换蛋白质的缓冲溶液，如果在真空或吸湿环境中也可作为浓缩蛋白质溶液的一种方法（例如PEG、Sephadex）。将蛋白质溶液盛在一个半透膜袋内，此膜能防止蛋白质丢失而无论在常压或减压下可与周围的缓冲溶液进行溶质交换。 除小体积样品之外，根据扩散原理进行的透析法非常耗时，因此蛋白质浓缩和交换缓冲液通常采用超滤法。然而，再不受时间限制情况下，也可选择透析。因为透析袋已成商品化，不需花时间准备，也不需要特殊仪器。 | ||||||||||
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| 实验材料 | 蛋白质溶液 试剂、试剂盒 | 烧杯磁力搅拌器和搅拌子透析管 仪器、耗材 | SephadexG-100或G-200 实验步骤 | 1.准备透析袋 市售的透析袋含有化学杂质。为了除去这些杂质，通常要用10mmol/L碳酸氢钠（NaHCO3/1mmol/LEDTA溶液煮沸透析袋30min。有人建议进行更多的处理。煮沸之后，应该用双蒸水充分洗涤透析袋。洗毕，在贮存于1mmol/LEDTA溶液中，以防止微生物的污染。每隔半年必须制备新的透析袋。Spectrum（公司）提供了一系列透析膜（Spectra/Pro7），这种透析膜由再生的纤维素经处理后制成，已经除去了重金属和硫化物。 2.在透析袋的一端打两个死结； 3.用移液管或漏斗将蛋白质溶液移入透析袋内； 4.在透析袋的另一端打两个死结并将器其放入10倍蛋白质溶液以上体积的缓冲液中，用磁力搅拌器缓慢搅拌以促进溶液交换。透析数小时后，透析达到平衡。透析缓冲液需要更换数次，使原有缓冲液成分逐渐减少。 5.透析缓冲液 为了浓缩蛋白质，透析袋应放入20％聚乙二醇或5％或乙二醇缓冲液中。然而，在使用PEG时，经常伴随有杂质进入透析物中，而需进一步的纯化处理。浓缩蛋白质溶液，较为迅速的方法是在4℃将透析袋埋入SephadexG-100或G200树脂中，3h后蛋白质溶液可浓缩5倍。 注意事项 | 1.常使用市售的透析夹（Spectrum），从而替代透析袋打结。 2.如果用此蛋白质溶液浓度更低的盐溶液或有机溶液进行透析，由于渗透压的作用，常导致水溶液进入透析袋。所以，应留有增加溶液体积的空间，以免透析膜破裂。 3.可选择透析袋分子量截流范围是100～300000Da（SpectrumMedical说明书）。 4.用微量透析袋进行小体积透析（10ul～0.6ml）。 其他 | 展开 |
