色氨酸紫外吸收光谱定性扫描及定量分析实验
| 实验方法原理 | 紫外-可见光谱是用紫外-可见光的物质电子光谱，它研究产生于价电子在电子能级间的跃迁，研究物质在紫外-可见光区的分子吸收光谱。当不同波长的单色光通过被分析的物质时能测得不同波长下的吸光度或透光率，以ABS为纵坐标对横坐标波长λ作图，可获得物质的吸收光谱曲线。一般紫外光区为190~400nm，可见光区为400~800nm。 紫外吸收光谱的定性分析为化合物的定性分析提供了信息依据。虽然分子结构各不相同，但只要具有相同的生色团，它们的最大吸收波长值就相同。因此，通过对未知化合物的扫描光谱、最大吸收波长值与已知化合物的标准光谱图在相同溶剂和测量条件下进行比较，就可获得基础鉴定。 参与蛋白质组成的20种氨基酸，在可见光区都无光吸收；在紫外光区只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸具有光吸收能力，其中以色氨酸吸收紫外光的能力最强，色氨酸、酪氨酸最大紫外吸收峰在280nm。因此，可以根据它们的紫外吸收光谱特征，在紫外-可见光谱分析仪的定性测量模式中通过光谱扫描测量其吸光度-波长的图谱，对它进行准确可靠的定性鉴别。蛋白质在280nm处有特征性的最大吸收峰是由它所含有的色氨酸和酪氨酸所引起的。利用这一性质可测定蛋白质的含量。 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 仪器、耗材 | 色氨酸标准溶液紫外-可见光谱仪 实验步骤 | 1．配置20μg·mL-1色氨酸标准溶液。 2．打开紫外-可见光谱仪，初始化仪器，预热5min。 3．定性扫描：在应用菜单中选择定性分析模式，在配置菜单中设置好需要的横坐标（波长值）扫描范围200~400nm和纵坐标（ABS或％T值）0~1ABS记录范围以及扫描。 4．定量分析：定波长扫描。将波长设定，改变分析物的浓度，可得不同的ABS值，据此可达定量测定的目的。 5．不同的仪器型号参照不同的使用说明。 注意事项 | 1．确定色氨酸在不同波长时的最大波长峰值。 2．固定波长扫描，绘制定量测量的工作曲线，计算未知浓度。 |
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2018-08-10
阅读（119）
▍
相关分类
▍
相关文章
欧米茄omega_卓越的标志
【求助】marker跑成这样是何原因,为何sdsPAGE下半部... 经验共...
蛋白芯片制作与应用(4)液态芯片原理 生物芯片 Labon...
一抗/二抗该选谁?
ELISA培训ppt课件
牙髓干细胞的分离培养 实验方法
分子生物学实验技术考试题库
质谱在蛋白质组学中的应用实验一方案9 蛋白质的同位素亲和标签...
braching是什么意思_braching在线翻译_英语_读音_用法_例句_海词词...
如何用LSV模型求解羊群行为？ 行为经济学与实验经济学 ...
亚摩斯(AMOS)YSH0818A养生壶隐藏式感温探头多重安全保护 单个装...
方案25.1 器官培养实验 实验方法
