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biopioneerinc/Presterilized LB Miller Broth, 1000ml/1/CMLS-1
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biopioneerinc/Presterilized LB Miller Broth, 1000ml/1/CMLS-1
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biopioneerinc
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CMLS-1
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Presterilized LB Miller Broth, 1000ml

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2021-09-04
用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3'端的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。 查看更多>
    之一 具有高扩增活性,高热稳定性的反转录酶  反转录酶,又称逆转录酶,是依赖RNA为模板的DNA聚合酶的统称。美国科学家H.M.Temin和D.Baltimore在1970年发现了反转录酶,并因此获得了1975年的诺贝尔生理学医学奖。反转录酶的发现对遗传工程技术起来到了巨大的推动作用,是研究真核或者原核生物目的基因,构建cDNA文库等实验不可或缺的工具,与Taq酶等共同构成了现代生物技术的的基础工具酶。        目前已... 查看更多>
反转录酶是由上海百赛生物技术有限公司代理或销售的Amresco品牌的试剂,产品来源于美国。上海百赛生物技术有限公司是中国最权威的反转录酶试剂销售服务商之一,在上海等地方销售反转录酶试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业反转录酶仪器产品及图片,以便挑选到性价比高,合适的反转录酶产品 查看更多>
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近日,来自德国海德堡 (Heidelberg) 欧洲分子生物学实验室 (EMBL) 的科研人员首次揭开了包被反转录病毒遗传物质的外壳的精细结构,比如 HIV,当这些反转录病毒复制成很多拷贝,大量组装过程中这种外壳结构显得尤为关键,且在病毒的整个生命周期当中,也是一个潜在的易感阶段。研究成果在线发表于《自然》杂志(Nature),该项研究也为潜在的以病毒外壳为靶点的药物研发提 查看更多>
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反转录病毒原液检测实验的相关实验步骤、实验技巧、实验protocol、实验经验及常见问题。辅助病毒是一种有时存在于无复制能力病毒原液中的有复制能力的病毒,辅助病毒的存在在动物的感染及谱系分析中会成为问题。 查看更多>
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人体内有没有逆转录酶? 123
具区胜境2010-07-15
最近做了RT-realtimePCR。样品如下:1,阳性对照;2,不加RT酶,加模板;3,不加RT酶和模板,做RT-PCR后,再做realtimePCR(Taqman)。realtime的样品除以上3个RT产物,另加一个无RT产物的对照,共4个样品。结果所有的样品都跑出了CT值……请问可能是什么原因?
反转录酶(Reverse transcripatse)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。
TAKARA反转录酶4度能放多久
  没有序列识别的功能,他就是简单的催化相邻DNA链的5-P末端和3'-OH末端以磷酸二酯键结合的反应,需ATP作辅酶。 不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接,也催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。
  反转录酶(Reversetranscripatase)是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA(cDNA)的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。
反转录酶M-MLV说明书上写的37度,Promega的反转录酶42度,请问我可以用M-MLV42度吗?
反转录酶的注意事项123
灰太狼咳卫2352021-08-01
反转录酶
在进行RT反应之前,应考虑以下几个方面:
1、RNA
成功的cDNA合成来自高质量的RNA,高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂,如EDTA或SDS。在提取RNA的过程中,要特别防止RNase的污染,同时在逆转录反应中经常加入RNase抑制剂以增加cDNA合成的长度和产量。RNase抑制剂要在第一链cDNA合成反应中,在缓冲液和还原剂(如DTT)存在的条件下加入,因为cDNA合成前的过程会使抑制剂变性,从而释放结合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNase抑制剂仅防止RNaseA,B,C对RNA的降解,并不能防止皮肤上的RNase,因此尽管使用了这些抑制剂,也要小心不要从手指上引入RNase,实验过程中经常更换新手套。
2、引物的选择
OligodT
选择OligodT时,要求RNA必须有PolyA,所以真核生物的mRNA都适用。适合长链甚至全长mRNA的RT,所以对RNA样品的质量要求较高,最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。假如想探索新的mRNA进行RT反应,建议推荐使用OligodT引物。使用OligodT引物要比随机引物和特异性引物的稳定性要好。
随机引物
适合各种RNA的RT,尤其适合模板丰度很低的情况(比如某个gene表达量很低)。选择随机引物时,第一链cDNA合成反应中就是以所有的RNA为模板,然后进行PCR反应时设计引物进行特异性扩增。同时要注意随机引物的量和总RNA量之间的关系,一般建议每5μg总RNA的随机引物的用量为50ng,如果每5μg总RNA的随机引物的用量超过250ng,可能会导致小片段产物(<500bp)的增加和长片断、全长产物产物的降低。
特异性引物
特异性引物只能用你设计引物时的下游引物做RT,引物设计质量影响RT的结果,而且不同引物退火温度本来就不相同,所以按照说明书按照一个温度做不是最佳选择,一般不推荐。向左转|向右转
想知道大家一般用的那个公司的产品,效果如何?

我用Trizol提取的植物叶片总RNA。
想要用两步法做RT,获得总的CDNA,再去PCR质体中的几个基因。
现在准备器材和试剂。但是网上关于RT-PCR的资料好像侧重原理操作比较多。对各个公司的试剂盒的特点不是很清楚。InvitrogenQiagenPromega这些国外品牌都挺贵。而且相互之间差别挺大的。大家一般用的哪个公司的产品,效果如何?
单独买反转录酶来做效果如何?国内公司的酶效果怎么样?比如Tiangen的酶?
我并不用做定量的RT-PCR,主要目的是获得目的基因的cDNA序列,做一下RNAediting相关的工作。所以要求并不是很高。
问题刁钻啊......   原则说毕竟酶起催化作用所酶促反应都能自反应(能量要给)反面讲若没酶反应变慢(些酶加速5000倍)所些反应都变极慢相于没反应   DNA复制连接没酶能半才连根磷酸二酯键能断掉细胞高度序集合根本没间让DNA悠闲自我复制说没酶现细胞序集合   所我给结论:
此酶需要RNA为引物,多为色氨酸的tRNA,在引物tRNA3′-末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性,因此没有校正功能,所以由反转录酶催化合成的DNA出错率比较高[1]。
好多酶的试剂说明书上都要求反应结束后灭活,如fermentas的MLV就是写着,反应结束后70度10分钟灭活,如果反转完了没有这个灭活,直接放冰箱中储存备用,会怎么样?影响后面PCR的扩增吗?
什么是反转录123
江山八秀2021-07-21
也称逆转录,某些RNA病毒存在该过程,就是以RNA为模板反转录为DNA.该过程需要逆转录酶。望采纳。
如题

反转录酶没有3-5外切活性,其保真度怎么保证呢?

大家做表达的时候,获取长CDNA片段怎么保证的呢?

我获得的2.5kb的片段,其中sequencing后发现有8个错突变,狂ft

高保真的KOD-PLUS扩增的,按道理说,PCR没这么夸张吧

请大家指点啊
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