Cell line Information:
Designations:293T/17 [HEK 293T/17]Depositors: Rockefeller Univ.Growth Properties: adherentOrganism: Homo sapiens Morphology: epithelialSource: kidneyAntigen Expression: SV40 T antigen [45408]Age: fetusComments: The 293T/17 cell line is a derivative of the 293T (293tsA1609neo) cell line. 293T is a highly transfectable derivative of the 293 cell line into which the temperature sensitive gene for SV40 T-antigen was inserted. 293T cells were cloned and the clones tested with the pBND and pZAP vectors to obtain a line capable of producing high titers of infectious retrovirus, 293T/17. These cells constitutively express the simian virus 40 (SV40) large T antigen, and clone 17 was selected specifically for its high transfectability.
The Transfection Reagent:
293T/17 Cell Avalanche™ Transfection Reagent is a new class of unique chemical formulations specifically formulated and optimized for transfecting 293T/17 Cells. The proprietary formulation of lipids and polymers ensures the highest possible transfection efficiencies and viabilities for 293T/17 Cells. For details of the developing process of this reagent, please go to: How did EZ Biosystems develop Avalanche™ Cell type/cell line specific transfection reagent series?
Features:
- Specifically optimized to deliver nucleic acids into 293T/17 Cells
- Highest efficiency to ensure experimental success
- Lowest Cellular Toxicity-maintain cell density and reduce experimental biases
- 0.5 ml is able to transfect about 1000 wells of 24-well plate
- Simplest and straightforward protocols
- Deliver single or multiple plasmids
- Synthesized from 100% animal origin-free components, making it easy to validate the absence of zoonotic diseases, such as BSE or viruses, in research experiments or cells lines
- Compatible with serum
- Suitable for Reverse Transfection
- Compatible with transfection in any plate format
EZBiosystems美国EZBiosystems™公司是一家全球性转染试剂和基因表达生产服务提供商,公司的研发宗旨是让生命科学研究变得更简单,快速,容易!该公司主要产品之一为新一代转染试剂Avalanche 系列产品,该产品集合了组合化学,分子生物学和细胞生物学技术。公司致力于开发针对不同细胞类型的专用转染试剂。公司研发团队由多个学科经验丰富的专家组成,包括组合化学、脂类化学、生物物理学、分子生物学和细胞生物学。目前,EZBiosystems™主要提供广谱性基因及siRNA体外转染试剂、体内转染试剂、生物治疗性蛋白表达专用转染试剂以及150余种细胞特异性转染试剂。
EZBiosystems特约代理EZBiosystems品牌名称:EZBiosystemsEZBiosystems品牌logo:EZBiosystems品牌官网:http://ezbiosystems.com/EZBiosystems品牌链接:http://www.annoron.com/brand-342.htmlEZBiosystems品牌介绍:EZ生物系统™是一家全球性的基因转染和基因表达产品和服务提供商。EZBiosystems™isaworldwideprovideroftransfectionandgeneexpressionproducts&services.OneofthemajorfocusesofEZBiosystems™hasbeentheresearch,development,andmanufactureofnext-generationtransfectionreagents----theAvalanche®TransfectionReagentseriesbyapplyingourexpertiseincombinatorialchemistry,molecularBIOLOGy,andcellbiology. EZBiosystems品牌相关产品:品牌货号名称规格EZ BiosystemsEZT-CRPR-1Avalanche®-CRISPR Transfection Reagent0.5ml 1.5mlEZ BiosystemsEZT-OMNI-1Avalanche®-Omni Transfection Reagent0.75ml 1.5ml5*1.5mlEZ BiosystemsEZT-EVDY-1Avalanche®-Everyday Transfection Reagent0.75ml 1.5ml
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1、直接竞争,标记抗原,与检测样品中的抗原竞争抗体。
2、间接竞争,标记抗体,固相抗原与液相抗原(样品)竞争标记抗体。
3、定义
间接竞争法的模型:包被抗原,用HRP-抗体与样本一起加入。样本中的Ag与Solid-Ag竞争HRP-Ab,固相吸附的HRP-Ab与样本中的Ag浓度成反比。
直接竞争法的模型:包被抗体,用HRP-抗原与样本一起加入。样本中的Ag与HRP-Ag竞争Solid-Ab,固相吸附的HRP-Ag与样本中的Ag浓度成反比。
4、竞争法的理论基础:是限量抗体。只有在限量抗体基础上,两种抗原才会形成竞争关系。
5、、间接竞争法具备较高灵敏度原因。
直接竞争法里,标记抗原与待测抗原均是液相,与抗体的结合机会是一样的,例如有1份标记抗原与1份待测抗原竞争1份抗体,那么有50%的标记抗原能与抗体结合,所以标记抗原的相对结合率为50%。间接法里,固相抗原与抗体的接触面积较小,固相抗原与待测抗原的结合抗体机会是不平等的,接近顺序饱和法,即只有与待测抗原结合剩余的抗体才会与固相抗原结合,同样有1份固相抗原与1份待测抗原竞争1份抗体时,基本上抗体会被待测抗原中和掉,与固相抗原结合的抗体非常少。固相抗原的相对结合率为0%。因此,间接法的抑制曲线斜率会大于竞争法。
因为抑制率越大则斜率越大,从而灵敏度越大。(假设零管变异5%,以两倍SD为灵敏度限,则为90%相对结合率,则间接法可以在较低的待测抗原浓度达到这一相对结合率,因此灵敏度要高。)
在进行系统放大时,间接法一般可以使用酶标二抗。因为二抗可以针对抗体的多个部位,所以存在放大效应,从而能提高间接法的灵敏度。直接法一般难以进行放大,常用的有生物 素化抗原与酶标亲和素,但模式上似乎不存在放大效应。
6、间接法的高灵敏度难以实现的原因:
双抗体 夹心的免放(IRMA)模式刚出现时,也被模型证明灵敏度优于竞争法的放免(RIA),原因也是较大的斜率,但是IRMA的高灵敏度一直到单抗发展后才得以实现。
GM实验:试剂说明书上要求20分钟显色,10分钟的时候看一下,差不多就可以加终止液,但是我的标曲显色特别快,2分钟最低浓度蓝色就就深了,此时样本颜色还很浅很浅,我只能一块儿加终止液。所以,标曲显色过快,可能是什么原因?
(ps:第一列是标曲,后面是样本)
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