Caspase-3 DEVD-R110 Fluorometric HTS Assay Kit is specifically designed for HTS-based assays. The kit provides a homogenous assay system for fast and highly sensitive detection of caspase-3 activity by fluorescence in enzymatic reaction or mammalian cells. The fluorogenic substrate (Ac-DEVD)2-R110 contains two DEVD tetrapeptides and is completely hydrolyzed by the enzyme in two successive steps. Cleavage of the first DEVD peptide results in the monopeptide Ac-DEVD-R110 intermediate, which has absorption and emission wavelengths similar to those of R110 (λEx/λEm = 496/520 nm) but has only about 10% of the fluorescence of the latter. Hydrolysis of the second DEVD peptide releases the dye R110, leading to a substantial fluorescence increase.
The assay kit includes Ac-DEVD-CHO, which is a caspase-3 inhibitor and can be used as a negative control. Also, R110 is provided in the kit for generating a standard curve, which can be used for quantifying caspase-3 activity. One mL cell lysis/assay buffer is sufficient for 10 assays in 96-well format.
Note: While caspase-3 preferentially cleaves the consensus sequence DEVD compared to other substrate sequences, other caspases also can cleave DEVD efficiently. Overlapping caspase substrate recognition limits the usefulness of caspase substrate peptides for distinguishing between different caspase activities in cell lysates.
Kit Components:
- Cell lysis/assay buffer
- Enzyme substrate (Ac-DEVD)2-R110
- Enzyme inhibitor Ac-DEVD-CHO
- R110
Features:
- HTS-compatible: Single-step homogenous assay specifically designed for HTS-based detection.
- Fast: Fast enzyme kinetics.
- Sensitive: Green fluorescent readout
For real-time detection of caspase-3 activity in intact cells, see our novel NucView™488 Caspase-3 Substrate.
References
1. Cell Death Diff. 6, 99 (1999).
2. J Biol Chem 274, 11549 (1999).
3. J Biol Chem 275, 288 (2000).
4. Biochemistry, 38, 13906 (1999).
Biotium公司是一家在荧光技术领域独树一帜的生物技术公司，公司位于美国加利福尼亚的BAYAREA------世界上首要的生物科技中心。该公司一直致力于开发和生产用于生物医学研究的荧光指示剂及其他特殊生化产品。其产品被广泛应用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液流动检测及大规模药物筛选等众多领域。Biotium公司专利产品众多，包括已经被广泛使用的实时PCR定量荧光染料EvaGreen、具有划时代意义的凝胶核酸染料GelRed和GelGreen，以及最新推出的CheetahTaq热启动酶个CF系列蛋白质标记染料等等。
GelReD®是一种超灵敏、极稳定和环境安全的荧光核酸染料，用于取代高毒性溴化乙锭（EB），用于在琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中染色dsDNA、SSDN或RNA。GelRed®比EB敏感得多，无需拆解步骤。 1.比EB更安全：Ames试验和其他试验显示无致突变和非细胞毒性 2.易处理：通过直接排放到下水道或常规垃圾中的环境安全试验 3.超灵敏：比EtBr和SYBR®安全型更灵敏 4.非常稳定：可在水中使用，在室温下长期储存稳定，可微波 5.使用简单：非常简单的预处理或电泳后凝胶染色程序 6.与标准紫外线透照仪兼容：无需改变光学设置即可替代EtBr 7.与下游应用兼容：凝胶纯化、限制性消化、测序和克隆 GelRed和GelGreen是设计以取代剧毒的代替高毒性的溴化乙锭（EtBr）的新一代核酸凝胶荧光染料。Biotium科学家研发的GelRed和GelGreen集低毒性、高灵敏性和出色的稳定性等优点于一体，效果由于EtBr及其他EtBr替代品。 几十年来，EtBr因极其低廉的价格，一般的灵敏度，一直被用作核酸凝胶染色的主要染料。然而EtBr是一个高度诱变的物质。该染料的使用安全隐患，净化及废物处置的相关费用等，终导致其代价高昂。正因如此，近年来市场上出现了一些替代品，如SYBR系列染料等。尽管这些替代染料减少了致突变性，但却丧失了染料其他方面的功能。例如，SYBRSafe的灵敏度很低，SYBRGreen及SYBRGold的稳定性远远低于EtBr。SYBR染料能快速的进入细胞，结合线粒体及细胞核DNA，是的染料在一定浓度是有毒的。事实上，在紫外线或其他诱变剂诱导下，SYBRGreenI强烈的突变性已经被广泛认知。（Ohta，etal.MutRes492,91(2001)） 为了保证GelRed和GelGreen的安全性，Biotium的科学家采用一种新型非常简单的概念：阻止染料进入活细胞减少遗传毒性。我们相信，不给DNA结合染料渗透活细胞中结合基因组DNA的机会，便可以保证染料没有或大幅度减少其诱变性作用。因此，我们设计的GelRed和GelGreen染料拥有独特化学结构保证其无法渗透细胞膜。Ames试验验证即使浓度远远高于实验者操作凝胶染色的工作浓度，GelRed和GelGreen也无诱变性。此外，环境的安全性试验表示，GelRed和GelGreen是完全无害的，对水生生物无毒。因此，废弃的GelRed和GelGreen可以直接倒入下水道，或按照普通垃圾处理。
GelReD®和EB具有几乎相同的光谱，因此您可以直接更换EB与GeldRead®，而不改变您现有的成像系统。
凝胶红可用于琼脂糖凝胶中dsDNA、ssDNA或RNA的预染色或后染色。凝胶红还可用于聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA、ssDNA或RNA的后凝胶染色。因此，凝胶化与下游DNA操作（如限制性消化、测序和克隆）兼容。
优势
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荧光燃料使用的问题有两个：
一个就是迁移性，使用时要严格控制用量，以避免产生迁移现象；
二是荧光染料使用有一个极限值，如果超量使用，导致荧光线被吸收，使吸收和发光成叠所致。
想请问一下，DAPI这个染料到底有没有膜通透性，我通过百度搜索查询关于DAPI染料的，基本上是说它能透过细胞膜对活细胞和死细胞均能染上蓝色；但是也有人说DAPI只可以透过死细胞膜，不能对活细胞进行染色，用以区分活死细胞，到底哪个是对的啊，蒙了！！！！！！
抗原抗体反应后，利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法
⑴荧光物质
1）荧光色素
许多物质都可产生荧光现象，但并非都可用作荧光色素。只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。常用的荧光色素有：
⑴异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4，最大吸收光波长为490--495nm，最大发射光波长520--530nm，呈现明亮的黄绿色荧光，结构式如下：
有两种同分异结构，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性、与蛋白质结合能力等方面都更好，在冷暗干燥处可保存多年，是应用最广泛的荧光素。其主要优点是：①人眼对黄绿色较为敏感，②通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
⑵四乙基罗丹明（rhodamine，RIB200）为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性质稳定，可长期保存。结构式如下：
最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为595～600nm，呈橘红色荧光。
⑶四甲基异硫氰酸罗丹明（tetramethylrhodamineisothiocyanate，TRITC）结构式如下：
最大吸引光波长为550nm，最大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。其异硫氰基可与蛋白质结合，但荧光效率较低。
⑵其他荧光物质
1）酶作用后产生荧光的物质某些化合物本身无荧光效应，一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮，后者可发出荧光，激发光波长为360nm，发射光波长为450nm。其他如碱性酸酶的底物4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基苯乙酸等。
2）镧系螯合物某些3价稀土镧系元素如铕（Eu3 ）、铽（Tb3 ）、铈（Ce3 ）等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光，其中以Eu3 应用最广。Eu3
螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于分辨荧光免疫测定。展开
这些染料都非常成熟，光毒和淬灭都很低，当然要考虑到你采集图像时的显微镜参数。
比如calcein，常用的示踪，绿光（虽然这些颜色只是根据光谱加上去的伪彩），但要考虑你的实验过程中结合细胞结构，是否会伴随calcein的泄漏，就是荧光降低。
dri，还可以看膜啊
cfda也不错
bcef虽是ph指示，但你试验时不仅可观察细胞，还可看细胞ph变化，也行。
当然你或许还要结合其他方法，如细胞免疫化学等手段去双染或多染，都需要综合考虑染料之间特性。单独染一个染料，有点浪费，不如多染，数据和图像也好看些。现在流行细胞成像。
我想用共聚焦观察间期染色体，用涂染探针，有一个问题很困扰我，我想涂染完染色后用DAPI复染细胞核，但是目前哈尔滨的共聚焦都没有紫外激发光，不能激发DAPI，我怎么才能实现，用红色涂一条染色体，用绿色涂另一条，用DAPI蓝色染核，同时成像呢，所说的双光子显微镜可以么？我实在很迷惑，求求版主别再删我的帖子，尽管我现在只是一个索取者，还不能给大家提供有用的信息，但是相信有一天会为大家做贡献的，谢谢了
1.小鼠Lewis肺癌细胞DNA含量测定方法
(1).从C57BL/6小鼠上切除肿块,在培养皿内用PBS冲洗.
(2).去除结缔组织及脂肪,剪碎肿块.
(3).小碎片移入1.20×38mm注射针,加压使其通过,于4℃条件下重悬细胞于HBSS中.
(4).将200～300μL细胞悬液(5×105细胞/mL)中加入3mL PI(50μg/mL),染色3LL细胞,于4℃存放20～30分钟.
(5).测定580～750nm之间的发射荧光,以去除末结合PI产生的激发光与发射光谱线之间的重叠部分.
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