DescriptionLeavesomefeedback! TestedandCertifiedforinvivoimaging(See"LuciferinFAQ"inadditionalinformation)Luciferinisacommonbioluminescentreporterusedforinvivoimagingoftheexpressionofluciferase.ThiswatersolublesubstrateforthefireflyluciferaseenzymeutilizesATPandMg2+ascofactorstoemitacharacteristicyellow-greenemissioninthepresenceofoxygen,whichshiftstoredlightinvivoat37°C.ThroughtheutilizationofATP,thereactioncanbefurtherusedtoindicatethepresenceofenergyorlifeinordertofunctionasalife-deathstain.Luciferinisacommonreagentusedthroughoutthebiotechnologyfieldandspecificallyforinvivoimaging.Luciferaselabeledtumorcells,stemcellsorinfectiousdiseasesareofteninoculatedintoresearchanimalssuchasratsormiceforinvestigation.Theinjectionofluciferinallowsforthereal-time,noninvasivemonitoringofdiseaseprogressionand/ordrugefficacyinthesemodelsystemsthroughBioluminescenceImaging(BLI).Luciferinisalsocommonlyusedforinvitroresearch,includingluciferaseandATPassays,genereporterassays,highthroughputsequencingandvariouscontaminationassays.FireflyLuciferinisidenticaltoBeetleLuciferin.(See"AdditionalInformation"forstructures.)ProductSpecifications:D-Luciferin,PotassiumSalt,4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylicacidpotassiumsalt,MOLECULARBIOLOGYGRADE(PremiumPure)Formula:KC11H7N2O3S2MW:318.42g/molColor:LightyellowpowderPurity:>99%pure.(QualityverifiedbynineindependentcriteriaincludingHPLCandFTIR.)Storage/Handling:Storedesiccatedat-20°C.Protectfromlight.PubChemChemicalID:44134804
GoldBio活体成像技术:早在1999年由美国哈佛大学Weissleder博士率先提出了分子影像学(molecularimaging,MI)的概念,即应用影像学的方法对活体状态下的生物过程进行细胞和分子水平的定性和定量研究。活体成像便是基于分子影像学孕育而生的,通过这个成像系统,可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移,感染性疾病的发展进程,特定基因的表达等生物学过程。活体成像技术主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术。★生物发光是用荧光素酶基因标记细胞或DNA。★荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP,Cyt及dyes等)进行标记。★这一技术对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高,不涉及放射性物质和方法,非常安全。操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高。
活体成像两种检测技术介绍活体成像特点优点缺点生物发光检测bioluminescence★荧光素酶(Luciferase)对基因、细胞和活体动物进行标记;★荧光素酶催化底物(例如荧光素钾盐)反应后,会产生化学发光。这种光是由化学反应而来,不需要激发光;★标记方法是通过克隆技术,将荧光素酶的基因插入到预期观察的细胞染色体内,通过对克隆细胞进行筛选,培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株。再将细胞株转移至特定的小鼠体内形成模型。★特异性强,无自发荧光;★高灵敏度,在体内可检测到几百个细胞,检测的深度在3-100px;★定量精确 ★信号较弱,检测时间较长;★仪器精密度要求较高;★细胞或基因需要转基因标记;★不可用于人体,不适用于抗体、多肽等标记荧光检测fluorescence★采用荧光报告基因(GFP、RFP等)或荧光染料进行标记;★需要外接激发光源,利用报告基因、荧光蛋白质或染料产生的荧光,就可以形成体内的生物光源。★荧光染料、蛋白标记能力强;★信号强,成像速度快,操作简便,实验成本较低;★未来可用于人;★适用范围广,可以是动物、细胞、微生物,也可以是抗体、药物、纳米材料等。★存在自发荧光,影响灵敏度;★光容易被动物组织吸收;★检测深度受限;★背景光干扰,定量准确度低
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前一阵子实验室开始使用一种新的核酸染料-goldview,取代原先用的溴化乙锭-EB.goldview现在是由赛百盛出售.以下摘自官方网站:
GoldViewTM核酸染料——使用说明
概述
GoldViewTM是一种可代替溴化乙锭(EB)的新型核酸染料,采用琼脂糖电泳检测DNA时,GoldViewTM与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈红色荧光。GoldView不仅能染DNA,也可用于染RNA。
通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验,致突变性结果均为阴性;而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂。因此用GoldviewTM代替EB不失为一种明智的选择。
使用方法
1.将100ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)在微波炉中融化。
2.加入5µlGoldView,轻轻摇匀,避免产生气泡。
3.冷却至不烫手时倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
4.电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录,则关闭相机的闪光灯,放在自动档即可;若使用凝胶成像系统照相,通过调节光圈、曝光时间,选择合适的滤光片,可得到成像清晰、背景较低的照片。
注意事项
1.胶厚度不宜超过0.5cm,胶太厚会影响检测的灵敏度。
2.加入GoldView的琼脂糖凝胶反复融化可能会对核酸检测的灵敏度产生一定影响,但不明显。
3.通过凝胶电泳回收DNA片段时,建议使用GoldView染色,在自然光下切割DNA条带,避免紫外线与EB对目的DNA产生的损伤,可明显提高克隆、转化、转录等分子生物学下游操作的效率。
4.虽然未发现GoldView有致癌作用,但对皮肤、眼睛会有一定的刺激,操作时应戴上手套。
电泳结果显示GV灵敏度与EB相当
问题1.Goldview到底是不是丫啶橙?
2.赛百盛不公布其成分的原因是害怕其为丫啶橙还是出于技术保密?
产品主要应用:点击化学(Clickchemistry)、蛋白质组学研究中的双向荧光差异凝胶电泳(2DDIGE)和实时荧光定量PCR(RealtimePCR)。
菁染料是性能优良的荧光标记染料,摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的。N-羟基琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂,广泛用于蛋白质、氨基酸多肽、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度,可改变其荧光发射波长,每增加一个双键,按照Huoffman规则正好红移约100nm。
菁染料Cy3和Cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物;另外,Cy5,Cy5.5和Cy7,Cy7.5的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度最高、最稳定的长波长染料,特别适合于活体小动物体内成像。但由于菁染料,尤其是不对称菁染料的合成副反应多,副产物极性相近,产物的分离提纯相当困难。菁染料特别是水溶性菁染料分子极性大,分离提纯越加困难。Lumiprobe供应脂溶性和水溶性菁染料。
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产品分子结构可替代染料编号:AGF1371A
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羰基活性荧光染料
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二苯胺
甲基绿派洛宁
还有一种忘了。
假期没法联系老师呵呵。
这三种的作用都是什么。
而且样品中的无水硫酸钠未变色,而做标准曲线的五个和空白对照的变为蓝色了,请高手指教,多谢!
还有,是否变蓝对测定结果有影响吗?
谢了哈
欢迎你!请下次规范发贴:)
健那绿染液是一种活体染液,实验对象必须是活细胞,健那绿可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色。
请各位大侠给予帮助!!
谢谢!!
健那绿——高中唯一一个活体染色剂。染线粒体的,染成蓝绿色
2、苏丹三 脂肪 橙红
3、苏丹四 脂肪 红
4、双缩脲 蛋白质 紫
5、龙胆紫 染色质 紫
6、碘 淀粉 蓝
7、健那绿 线粒体 绿
8、甲基绿 DNA 绿
9、吡罗红 RNA 红
10、溴麝香草酚蓝 CO2 由蓝变绿再变黄
11、重铬酸钾 酒精 酸性条件下由橙色变成灰绿
12、醋酸洋红(龙胆紫、改良苯酚品红) 染色质 红
13、台盼蓝 检验活死细胞 死细胞会被染成蓝色(不常用)
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