去壁低渗法制备植物染色体标本实验一基本方案
| 实验方法原理 | |||||||||||
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| 实验材料 | 黑麦(Secalecereale)、大麦(Hordeumvulgare)种子或洋葱(Alliumcepa)鳞茎 试剂、试剂盒 | 对二氯苯饱和溶液甲醇冰醋酸70%酒精纤维素酶果胶酶Giemsa原液磷酸缓冲液(pH6.8～7.2)KCl 仪器、耗材 | 恒温培养箱显微镜载玻片酒精灯 实验步骤 | 1.取材:先将种子浸泡若干小时,然后转入一垫有湿润滤纸的培养皿中,置25℃恒温培养箱中萌发,待幼根长至1～2cm取材;或鳞茎置于盛水的培养皿中,放在25℃恒温培养箱中,待根尖长至2cm左右取根尖(顶端0.5～1cm)。 2.预处理:将取下的根尖置于盛有对二氯苯饱和水溶液的青霉素瓶中,浸泡处理3～4h。 3.前低渗:将根尖放在0.075mol/LKCl溶液中处理30min。 4.酶解去壁:倒去KCl溶液,用蒸馏水充分洗净。加入混合酶液(纤维素酶与果胶酶各占2.5%),25～30℃下酶解2～3h。在酶解过程中最好轻轻摇动瓶子,促使酶解反应更加充分。 5.后低渗:倒去酶液,用蒸馏水慢慢冲洗2～3次,然后在蒸馏水中停留10min进行后低渗处理。 6.固定:甲醇∶冰醋酸(3∶1)固定液固定30min。 7.涂片:取2～3个根尖置于擦干的洁净载玻片上,切下顶端1～2mm,滴上1～2滴甲醇-冰醋酸(3∶1)固定液,用镊子迅速捣碎根尖组织,均匀涂布于载玻片上,在酒精灯火焰上掠过3～4次。 8.染色:Giemsa原液与1/15mol/L磷酸缓冲液(pH7.2)以20∶1混合,分装入染色缸,将干燥的制片置于染液中,也可将染液直接滴在载玻片上,染色时间约30min。自来水冲洗载玻片,空气干燥后即可进行镜检。 先在低倍物镜下进行观察,找到较好的中期分裂相后,直接加显微镜油并转换为油镜头进行观察(若使用香柏油,则需加盖玻片,因为在香柏油中染色体会褪色)。选择较好的分裂相用显微镜上配备数码照相装置摄影 注意事项 | 其他 | |
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发布于 ： 2018-08-05
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