固相化 pH 梯度双向凝胶电泳实验一方案10 胶体考马斯亮蓝染色实验
| 实验方法原理 | 此方案是在对Neuhoff等的方法进行修订的基础上建立的（1988)，包括考马斯亮蓝G250和蛋白质的结合。考马斯亮蓝G250可以结合碱性氨基酸如精氨酸、酪氨酸、赖氨酸和组氨酸，染料的胶体特性使产生的背景非常低。这一特性可以阻止考马斯亮蓝渗透凝胶，避免考马斯亮蓝R250染色时较长的脱色过程。胶体考马斯亮蓝通常用于染色凝胶，检测范围为8~50ng。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 包含蛋白质样品的凝胶 试剂、试剂盒 | 考马斯亮蓝染料储备溶液固定液甘油甲醇 仪器、耗材 | 玻璃平皿或塑料平皿往复式或定轨式摇床 实验步骤 | 1.将凝胶置于玻璃或塑料培养皿中固定，轻轻摇动至少1h。 可将凝胶固定过夜。如果凝胶有标记，多个凝胶可在同一培养皿中固定，固定液的体积应足够大，以使所有凝胶都能自由移动。 2.移走固定液，在摇床上用水清洗凝胶10min。 3.弃去水，重复洗2次。 4.在洗第三次时，将4份考马斯亮蓝储备液和1份甲醇混合，以制备胶体考马斯亮蓝染液。 5.将凝胶放在100~300ml胶体考马斯染料内（染料的体积依胶的大小而定，确保染料覆盖凝胶）。在往复式或定轨式摇床上，轻摇过夜。 凝胶应在染料中放置足够长时间，其颜色会持续加深一直到第七天。 6.去除残留染料，将凝胶转移至盛有45~55°C双蒸水或去离子水的干净平皿中。 当水变色时弃去，再次用新的45~55℃的H2O轻轻摇晃清洗凝胶。重复几次，直到蛋白质带较凝胶背景变得明显，蛋白质将在清晰的背景上出现蓝色。 7.凝胶可用于扫描分析。扫描湿凝胶较好，因为若凝胶干燥易破裂，导致数据的丢失。 8.在干燥之前，将凝胶浸在5%甘油中30min，凝胶也可装在密封塑料袋内，储存于4°C。 |
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发布于 ： 2021-09-22
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