放射自显影原位杂交玻片的复染和压片固定实验一姆萨 (Giemsa) 染色
| 实验方法原理 | |||||||||||
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| 实验材料 | 水化并显影的原位杂交玻片 试剂、试剂盒 | 吉姆萨染色液（Fisher)710mmolL磷酸钠缓冲液pH6.8(500mmolL原液按1:50稀释）50%、70%、95%和100%乙醇、二甲苯封片介质为Permount(Fisher)或Gelvatol(现称Airvol来自AirProductsandChemicals) 仪器、耗材 | 玻璃染色盘13个平头镊Whatman3MM滤纸条42℃温箱 实验步骤 | 1)将显影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盘中。 2)在染色盘中，准备以下各组液体： 1个盘：用pH6.810mmol/L磷酸钠缓冲液配制的25倍稀释的吉姆萨染液； 3个盘：水。 脱水系列溶液（可重复使用）： 3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇；2个盘：盛有100%乙醇； 3个盘：盛有二甲苯。 3)在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20s(依染色时间决定染色的强弱）。将玻片在水中浸泡3次，每次2min。 4)用乙醇系列溶液脱水，每盘中浸泡2mm,将玻片移至二甲苯盘中，每次浸泡2min,共3次。应注意进行脱水和在二甲苯中平衡的操作，因Permoimt不与水或乙醇相溶。 5)在通风橱中，按如下操作压片固定：用一平头镊（拿在左手），从二甲苯中取出一块玻片，夹住磨面端置水平。加4滴Permmmt于另一端（切片所处位置），右手拿一干净的盖玻片，很缓慢地放在载玻片上。在加压片固定介质和盖玻片前，勿使玻片变干，因微小气泡会造成入为假象。 如用Gelvatol，对切片无需进行脱水处理。例如，在免疫组化试验中。以Gelvatol进行压片固定按如下进行：滴1小滴Gelvatol于盖玻片上，小心将载玻片贴于液滴上，防止产生气泡。避免施压，否则可能压坏样本，室温下放2〜4h使之凝固。 6)用3MM滤纸，沿盖玻片边缘，小心吸去多余封片介质/二甲苯，并擦拭载玻片背面（勿擦拭盖玻片）。勿将玻片直立存放于玻片中，因此时封片介质尚未凝固。 7)将玻片平放于一硬纸盘上，置42℃温孵箱2天使之凝固。 8)以剃须刀片小心刮去载玻片背面残留胶乳、染料和封片介质。用镜头纸或普通棉纸擦去尘埃。放入玻片盒，必要时，在载玻片上再注明标签。 9)显微镜观察玻片，观察时可依信号强弱调节光亮。 注意事项 | 其他 | |
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发布于 ： 2018-08-06
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