酵母遗传学方法实验指南——技术和方案一技术和方案13 已固定细胞的肌动蛋白染色
| 试剂、试剂盒 | PBS固定液 实验步骤 | 鬼笔环肽专一性地结合F肌动蛋白，荧光标记的鬼笔环肽染细胞与肌动蛋白抗体的染色模式类似。 1.在500ml三角瓶中振荡培养25ml酵母菌至密度为2X107个/ml。 2.添加17ml10%甲醛（EM电子显微级）到培养基中至终浓度4%，在酵母菌生长温度下固定细胞10min。 3.2000~3000r/min离心5min，收集细胞。 4.在6ml加了4ml10%甲醛（EM级）的PBS溶液中室温固定细胞lh。 5.用10mlPBS洗细胞两次，重悬在500ulPBS中。 6.取180ul细胞悬液，添加20ul罗丹明鬼笔环肽或荧光素鬼笔环肽。避光温育lh，每融15mm轻轻混合。 7.用1mlPBS洗细胞5次。 8.悬浮细胞在约200ul免疫荧光固定液中。放置于-20°C，染色细胞可以保存几个月。 9.观察细胞时，滴1ul细胞悬液在盖玻片下，通过毛细管作用细胞液能铺满玻片。确保玻片清洁。 |
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发布于 ： 2018-08-05
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