蛋白质染色实验一快速银染法
蛋白质染色（银染法）标准操作规程（编号：
041
）
1
、目的及适用范围
检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质，
实验原理是在碱性条件下，
用甲醛将蛋白带上的硝酸银
（银
离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，
不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
2
、主要仪器
摇床、避光盒
3
、试剂及配制方法
乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或
EDTA.Na
2
.2H
2
O
、甲醛，去
离子水
固定液：
100mL
乙醇（
40%
乙醇）
，
25mL
冰醋酸（
10%
冰醋酸）加水到
250mL
；
致敏液：
75mL
乙醇（
30%
乙醇）
17g
乙酸钠，
28.2g
三水乙酸钠（
34g
乙酸钠）
，
0.5g
硫代硫
酸钠加水到终体积
250mL
；
银染液：
0.625gAgNO
3
，
100uL37%
甲醛（在使用前加入）加水到终体积
250mL
；
显色液：
6.25gNa
2
CO
3
，
50
μ
L37%
甲醛（在使用前加入）加水到终体积
250mL
；
终止液：
3.65gEDTA.Na
2
.2H
2
O
或者
1g
甘氨酸加水到终体积
250mL
保存液：
1%
冰醋酸
4
、操作步骤
4.1
固定：
50mL
固定液中固定
30min
或者更长时间
4.2
致敏：
50mL
致敏液中致敏
30min
4.3
水洗：
3
x
10min
4.4
银染：
50mL
银染液中染
20min
（保持避光）
4.5
水洗：
2x1min
(
注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色
)
4.6
显色：
50mL
显色液中显色，时间视显色程度而定
4.7
终止：
50mL
终止液中终止
10min
4.8
保存：
1%
冰醋酸，
4
℃
5
、注意事项
88
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发布于 ： 2018-08-07
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