蛋白质定量实验一碱性铜还原分析法
| 试剂、试剂盒 | Folin-Ciocalteu试剂硫酸铜试剂碱性铜试剂 实验步骤 | 碱性铜还原分析法(Lowry法）（Lowryetal.，1951)和其他能够增强检测性能的方法都是基于一个包括两个步骤的过程。首先，双缩脲反应涉及蛋白质在碱性溶液环境中将铜还原（由Cu2+到Cu+);随后是反应增强的阶段,Folin-Ciocalteu试剂(憐钼酸盐和憐钨酸盐)(PeterSon,1979)被还原后产生一种在750nm处有最大吸光度的蓝色物质。这种检测方法因蛋白质序列的不同而有所变化，因为颜色的产生不仅取决于还原的铜-酰胺类复合物，而且还与酪氨酸、色氨酸有关，在较小的程度上还与胱氨酸、半胱氨酸、组氨酸残基等有关(Peterson,1977;Wuetal.，1978)。 Lowry法已经被改良以减少其对干扰物的敏感性、增加动态范围、缩短检测时间以及产生稳定的颜色生成物(Peterson,1979)。有许多商业来源的改良Lowry法(Roche、Pierce、Bio-Rad和Sigma)，但不同的制剂可能不会得到相同的结果数据，即便是使用相同的标准品、稀释缓冲液或存在相同的干扰物质。 1.向1mL含量为5~100pg/mL的一系列蛋白质标准品及该浓度范围内的待测样品中分别加入ImL碱性铜试剂，混匀,室温放置10min。 2.加人0~5mLFolin-Ciocalteu试剂混合物，祸旋使之充分混匀，孵育30min。 3.孵育完成后再次涡旋混匀，检测750mn处的吸光度。 吸光度的读取范围可以从650~750nm,这取决于可用的合适的滤光器(酶标仪），或者，如果信号太强，不会对检测性能产生显著的影响。Lowry法不是端点检测（endp0intassay)，所以样品检测应该交错进行以获得更精确的测量值。 4.在有限的标准品浓度范围内观察到的反应将是线性的。可用多项式、指数和对数模型拟合数据以扩大反应曲线的动态范围。 上述的Lowry法可适应于微孔板，以减少所加人反应物的体积，产生的动态为50~500ug/mL。由于灵敏度、线性及方法学上的进步，Lowry法已基本被BCA法所取代。 Lowry法对许多干扰性化合物敏感(表8.1)，对于这些物质可能不会产生线性反应(因而导致要推断复杂的干扰数据）。去污剂、脂类、钾离子和磷酸钠的存在会导致沉淀产生。 |
|---|
免责声明 本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容。
版权声明 未经蚂蚁淘授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
发布于 ： 2021-08-30
阅读（250）
▍
相关分类
▍
相关文章
细胞死亡的生化分析实验 实验方法
动物细胞的基本形态观察实验_实验⽅法_
白血病细胞的免疫分型 实验方法
Preparation of Anion Exchange Resins Based on ...
IMS100雪花制冰机IMS100 100Kg/天_价格_上海子期实验设备有限公司
蛋白芯片制作与应用(3)操作流程
Yale RNA prep 实验方法
混悬型液体药剂的制备
微软北美开售全息眼镜HoloLens 每人限购五台
解读标准品、校准品、质控品的区别帖子标准物质网
细胞活性(MTT)测试盒_北京鸿跃创新科技有限公司
Fetal Bovine Serum Premium Select S11550: R&D Systems
▍
相关问答
