痘苗病毒储液制备一噬斑分析测定滴度
| 实验方法原理 | 经胰酶作用的系列稀释病毒储液常被用于感染适当的细胞系。经过几天的培养后，吸出培养基，将细胞用结晶紫染色。由于感染细胞变缩、变圆和脱落，形成直径1～2mm颜色较淡的噬斑。 | ||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | 生长良好的贴壁培养的单层BSC-1细胞病毒储液 试剂、试剂盒 | 0.1%结晶紫（溶于20%乙醇） 仪器、耗材 | 6孔35mm2组织培养板 实验步骤 | 1.胰酶消化汇片生长的单层BSC-1细胞（见「细胞培养实验」基本方案1步骤4～7）。 2.用血细胞计数器对细胞进行计数。 3.将5×105个/孔BSC-1细胞加入2ml完全MEM-10培养基在6孔的35mm2组织培养板中培养，放入5%CO2加湿培养箱中37°C培养过夜，直到细胞生长至汇片。 4.胰酶处理病毒储液（见基本方案步骤4）。 5.用完全MEM-2.5培养基对胰酶处理后的病毒储液进行9次10倍系列稀释，注意每次稀释必须用新的吸管。 6.吸出BSC-1细胞的培养基，用0.5ml10-7、10-8、10-9病毒稀释液感染细胞，每个稀释度感染两个孔。放入CO2培养箱中37°C培养1～2h，每隔15～30min轻轻摇动培养板，使病毒均匀分布，细胞保持潮湿。 7.在每个孔中加入2ml的完全MEM-2.5培养基，放入CO2培养箱中37°C培养2天。 8.吸出培养基，每孔加入0.5ml的0.1%结晶紫，室温下孵育5min。 9.吸出结晶紫，使孔晾干。 10.计算每孔中的噬斑数确定滴度，再乘以稀释倍数。 注意事项 | 每孔中有20～80个噬斑一般可以取得较好的结果，在测定滴度时，可以考虑用胰酶对病毒储液进行1:1稀释。 其他 | |
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发布于 ： 2018-08-03
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