清门冬氨酸氨基转移酶AST测定实验一血清门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定实验
| 实验方法原理 | AST催化门冬氨酸与α-酮戊二酸的氨基转换反应，生成草酰乙酸和谷氨酸。 L-门冬氨酸十α酮戊二酸＝草酸乙酸十L-谷氨酸 经60min反应后，加入2,4二硝基苯肼终止反应，并与反应液中的二种α-酮酸生成相应的2,4二硝基苯腙，在碱性条件下，两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在500－520nm处差异最大，草酸乙酸所生成的苯腙的显色强度显著大于α-酮戊二酸本腙，据此可用比色法测定AST活力。 |
|---|---|
| 实验步骤 | 一、实验试剂： l.0.1mol/L磷酸盐缓冲液，PH7.4 2.1mmol／L2，4二硝基苯肼溶液 3.0.4mol/L氢氧化钠溶液 4.2mmol/L丙酮酸标准液 5.AST底物溶液（DL-门冬氨酸200mmol/L.α-酮戊二酸2mmol/L）：称取α-酮戊二酸29.2mg和DL-门冬氨酸2.66g，置于一小烧杯中，加人lmol/L氢氧化钠溶液1.5ml，溶解后加0.lmol/L磷酸盐缓冲液80ml，用lmol/L氢氧化钠调至PH7.4，然后将溶液移人100ml容量瓶中，用磷酸盐缓冲浪稀释至刻度放置冰箱保存。 二、实验操作：   各管混匀后，置37℃水浴箱保温20min，然后每管加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml，室温放置5min，用分光光度计在波长505nm处以蒸馏水调零点，读取各管吸光度，测定管吸光度减去样本对照管吸光度，从标准曲线套得AST活动单位。 标准曲线绘制：  参考值：8-28卡门单位。 |
| 注意事项 | l.本法的缺点是标本AST活性高时草酰乙酸对AST现实反锁抑制，使测定结果偏低，酮血症中乙酰乙酸及β-羟基丁酸，因没对照管不会引起测定结果假性偏高。 2.若用L-门冬氨酸称量为1.33g。 3.等血清酶活力超过15O卡门单位时，应将血清用生理盐水稀释5倍或10倍后再进行测定。 4.底物中的α-酮戊二酸和2,4-二硝基苯肼为显色物质，称量必须准确，每批试剂的空白管吸光度上下波动范围不应超过0.015A，如超出范围应检查试剂和仪器方面问题。 |
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发布于 ： 2018-08-07
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