Product Name | NF - kB Inhibitor, SN50AAVALLPAVLLALLAPVQRKRQKLMP |
Size | 1 mg |
Catalog # | AS-64660 |
US$ | $199 |
Purity | % Peak Area By HPLC ≥ 95% |
This is a membrane-translocating peptide sequence consisting of the hydrophobic region of the signal peptide of Kaposi fibroblast growth factor (K-FGF) attached to a NF-kB nuclear localization sequence (NLS). SN50 inhibits translocation of the NF-kB activ | |
Detailed Information | Material Safety Data Sheets (MSDS) |
Storage | -20°C |
References | Lin, YZ. et al. J Biol Chem 270, 14255 (1995). |
Molecular Weight | 2781.5 |
AAVALLPAVLLALLAPVQRKRQKLMP | |
Sequence(Three-Letter Code) | H - Ala - Ala - Val - Ala - Leu - Leu - Pro - Ala - Val - Leu - Leu - Ala - Leu - Leu - Ala - Pro - Val - Gln - Arg - Lys - Arg - Gln - Lys - Leu - Met - Pro - OH |
Product Citations | Fukuyama, Y. et al. (2012). Alkylated dihydroxybenzoic acid as a MALDI matrix additive for hydrophobic peptide analysis. Anal Chem 84, 4237. |
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2.SNaPshot 该技术由美应用物公司(ABI)发基于荧光标记单碱基延伸原理型技术称测序主要针等通量SNP型项目含测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临态位点5’-端同度延伸引物PCR产物模板反应体系引物延伸碱基即终止经ABI测序仪检测根据峰移位置确定该延伸产物应SNP位点根据峰颜色知掺入碱基种类确定该本基型于PCR产物模板通重PCR反应体系获通用于10-30SNP位点析
用takara的in-fusion方法做了个重组质粒,如左图PCR验证,右起第二道是空载质粒为模板的对照。右图是酶切验证,两个图片结合起来觉得除了第四个单克隆外,其他几个应该都可能是阳性克隆。结果送了1,2两个样品后测序的结果都不对。为什么会这样。
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
期待着高手们的指点,谢谢。
两个基因大小分别230kb和450kb,酶切后,450kb的有目的条带,但很弱,230kb的质粒条带亮,其下方有一很微弱条带,用的酶分别是:Ncol和Spel体系是(Takara,两个酶切体系不同,用的官网推荐体系):
NcoI1μl
Spel1μl
10×KBuffer2μl
0.1%BSA2μl
DNA3ul
灭菌水upto20μl37℃4h电泳1h
以这些标准看,目前的基因组测序结果,还没有一个是完美的。
人类基因组:缺点在哪里?
首先,人类基因组还不够精确。人是“二倍体”,也就是有一半遗传物质来自父亲,一半遗传物质来自母亲,且在受精卵形成过程中,还会发生基因重组,这是人类遗传多样性的来源之一。科学家们需要更精确的“单倍型”数据,这样基因组才够“完美”,而这种“完美”正是研究者们追求的目标。
其次,人类基因组还不够多元。
按照传统的人种分类,人类按照肤色黑白黄棕,被粗分为四大类:尼格罗人种、高加索人种、蒙古人种、澳大利亚人种。基因组测序数据是从高加索人种开始的,人类基因组计划是人类的标准参考基因组,也是高加索人种的标准参考基因组。文特尔的基因组,测序对象是他自己,同样是高加索人种。
然而,从基因组研究的角度,为了尽可能地包括各种遗传背景,需要为更多族裔建立自己的参考基因组。
资料来源:http://www.mv163.cn/jkgl/news/2015/1224/5227.html
【之前构建的4个重组质粒里也有两个出现这样的问题(aagtcc变成agtcc),但是酶切能切出插入的片段】
目前问测序公司得到的答复是样品可能不是单克隆,测序结果是不准确的,建议重新挑取单克隆测序。
不知道还有没有别的方法?
目的片段用kpn1和xho1双酶切,然后连接到PGL4.10上,结果用RPV3测序出来目的序列是反向互补的,这是什么原因导致的?
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