【求助】bacfish 试验相关问题，谢谢！
2021-07-28
问题描述：
我现在要用bac克隆自己标记成探针做人类染色体水平的fish，以确定染色体的具体断裂位置。
现在已经把bac克隆的质粒DNA提取出来了，但是在标记探针前，有以下几个疑问：
1：提取出的质粒DNA是否需要通过测序等方法进行验证该克隆的准确性？
2：是否需要把bac克隆的DNA从载体上酶切下来？如果酶切，UCSC数据库中提供的两侧序列末端的酶切位点就是吗？如果不用酶切，那载体片断在探针标记时会不会一同标记上从而影响后续试验结果？
3：在探针标记前，酶切或不酶切得到的bac克隆DNA是否需要进一步纯化？用普通的琼脂糖电泳切胶回收纯化就可以吗？那所用的切胶回收试剂盒应该是哪种的呀？
4：像我这种自己标记好探针，在作fish时，有现成的试剂盒吗？
第一次做fish，有好多不是很清楚的地方，查阅大量文献中也只是提供其中几个关键步骤，希望有经验的朋友提供宝贵意见，给与指导。
非常感谢！！！
*请输入10-500个字符
已帮助
0人
0人
yawenjilin
用户
不要沉下去呀，我自己顶一下！
已帮助
0人
0人
yawenjilin
用户我一直在线等着，谢谢大家了！！！
已帮助
0人
0人
yawenjilin
用户急求各位大侠的指教，再次感谢！
已帮助
0人
0人
清风万里
用户1、不知你所选择BAC的原则，PCR或其它方法都可以，只要证明你所选的BAC是你的目的BAC就行了2、不用酶切，用缺刻平移试剂盒标记探针在300-1000bp，载体对杂交影响不大3、一般来说杂技会影响标记的效果，是否要纯化关键要看你的BACDNA的质量，如果你的BAC纯度较高不纯化也行，现在有BAC纯化试剂盒，价格也不高。4、罗氏公司的试剂盒效果很好
▍
相关分类
▍
相关文章
