降落PCR一基本方案
| 实验材料 | 基因样品 仪器、耗材 | PCR 实验步骤 | 1. 反应体积为50μl。 2. 人CD137胞膜外区基因的PCR扩增体系：CD137-pCDNA3质粒4μl，P1，P2各0.5μmol/L，MgCl22mmol/L，dNTP0.4mmol/L，Taq5U。 3. hIgG1Fc片段的PCR扩增体系：含人hIgG1Fc的PGEM-T质粒4μl，P3、P4各0.4μmol/L，MgCl2 2mmol/L，dNTP0.4mmol/L，Taq5U。 4. HBVDNA多聚酶基因的PCR扩增体系： （1）第一轮：HBVDNA模板4μl，P5、P6各0.25μmol/L，MgCl21.5mmol/L，dNTP0.2mmol/L，Taq0.8U. （2）第二轮：取5倍稀释的第一轮PCR产物4μl为模板，P7、P8各0.25μmol/L，MgCl2 1.5mmol/L，dNTP0.2mmol/L，Taq0.8U。 5. 分别在各灭菌PCR管加入上述各反应成分，100℃煮沸5min，立即冰浴5min，加入TaqDNA聚合酶，混匀，离心，PCR程序如下： 注意事项 | 1. 由于目标是在较早的循环中避免低Tm值配对，在TD—PCR中最好应用热启动技术。设计时，退火温度的范围应跨越15℃左右，从高于估计Tm值至少几度到低于它10℃ |
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发布于 ： 2021-08-04
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