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separopore/Arginine Separopore® 4B/25 mL/20181125-2
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separopore
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Arginine Separopore® 4B

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PolyATtract® mRNA Isolation SystemsThe PolyATtract® mRNA Isolation Systems utilize Promega"s MagneSphere® technology to eliminate the need for olig 查看更多>
虽然 FDD 利用了真核 mRNA 的多聚腺苷酸 [poly(A)+] 位点,但并不推荐使用 poly(A)+RNA,因为在反转录反应中可能污染寡核苷酸,并因此增加假阳性的概率。所以建议使用总 RNA 做 FDD 分析。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。 查看更多>
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siRNA DesignRNAi target selection rules:Targeted regions on the cDNA sequence of a targeted gene should be located 50-100 nt downstream of the start codon (ATG 查看更多>
DROSOPHILA RNA PREP(Goodman Lab) Stock Solutions 3M NaOAc, pH 5.2 with HAc (MW=82) 6M Guanidine Hydrochloride in 0.1M NaOAc, pH 5.2 (MWGuHCl=95.54) 5.7M Cesium 查看更多>
RNA 实验技术手册(分子克隆-实验指南系列) 查看更多>
Isolation of DNA from Mouse Tail Biopsies1. Obtain tail biopsies from 2 to 3 week old mice: Hold mouse firmly at base of tail with one hand, with the other cut 查看更多>
We routinely produce dsRNA by in vitro transcription of a PCR generated DNA template containing the T7 promoter sequence on both ends (I. Primer Designed dsRNA 查看更多>
Question 1.What are the differences among RNase H, RNase A, RNase B and RNase C?2.In your cDNA kits, RNase H is added in the second strand reaction to produce 查看更多>
用测定生成还原糖(葡萄糖和果糖)的量来测定蔗糖水解的速度,本实验中,蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5 min,每产生1毫克葡萄糖所需酶量。本实验旨在测定各级分的蛋白质含量及蔗糖酶活性。 查看更多>
本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。 查看更多>
Northern BlotI. Electrophoresisclean gel box with NaOH and/or SDS, 2 hours to overnight, rinse with water prepare Agarose gel solution [1 % Agarose, 1 x MOPS, 查看更多>
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天根RNA试剂盒DP419提取的蛋白可以做WB吗:分三层后,上层是RNA,那个中间层的蛋白怎么提出来纯化一下做WB?请高手解答,非常感谢!
RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,(长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性)所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。
E.Z.N.A. Total RNA Kit I
步骤
A. 真核细胞和组织
自己需要的材料:
β-巯基乙醇、70%乙醇(DEPC水配置)、除RNase的枪头和EP管。
材料的最佳量
想得到最佳的产量和好的Hibind RNA柱的纯化效果,选用正确的细胞和组织量是最重要的。Hibind RNA柱的最大处理量是可变的,根据细胞和组织的类型。最大的结合能力是100ug的RNA。TRK裂解缓冲液的最大裂解能力是1*107个细胞或30mg的组织。
细胞的步骤
1. 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞(≤1*107),使细胞团松散,轻轻弹EP管或者用枪头吹旋,再用漩涡振荡混匀。
a) 使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β-巯基乙醇。
b) 如果是单层的组织培养细胞(成纤维细胞,内皮细胞等),可以直接在细胞培养器里裂解细胞。完全吸去培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。加700ul的TRK到T35细颈瓶或250px的培养皿中,更小的培养器加500ul的TRK。将液体布满整个器皿表面,确保细胞裂解完全。将裂解产物转移至1.5mlEP管中。
c) 如果细胞是悬液培养,收集细胞(≤1,500rpm or 400*g)*5min,弃上清,加入TRK裂解液,漩涡振荡混匀,转移到1.5ml EP管中,进行步骤2。
2. 匀浆化裂解产物
“裂解和匀浆化样品”-第四页有详细的说明,如果细胞≤1*105,漩涡振荡1min。不完全使样品匀浆化会显著的减少RNA的产量还容易造成柱子堵塞。
a) 用匀浆器30 s,使样品匀浆化。
b) 用钝的针头的注射器(0.9mm直径),至少吹打5次是样品匀浆化。注射器要除RNase。
3. 将匀浆后的裂解产物转移至Homogenization Spin Column中,离心,≥1,4000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。转到总RNA分离中第4步。
组织的步骤:
1. 用500ul的TRK裂解缓冲液裂解细胞(≤30mg),使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β-巯基乙醇。
500ulTRK裂解液最大裂解能力30mg,难破碎的组织大于20mg就用700ul的TRK裂解液。当组织量超出建议的最大量时,也不要超过40mg。
组织样品匀浆化参照第四页选择一种方法只用,除非是使用液氮,
2. 离心,≥1,5000*g, 5min, 室温。
3. 转移上清至,Homogenization Spin Column中,离心,≥1,3000*g, 3min,室温。将离心收集的流出液转移到新的EP管中。
总RNA分离:
4. 在裂解产物中加入50%体积(250ul-350ul)的无水乙醇(96%-100%)混匀,漩涡振荡20s。
5. 样品转移到Hibind RNA Mini column上,离心管的最大容量为750ul,加完乙醇后可能会形成沉淀。所以要充分振荡将所有的混合液加入到柱子上。室温离心,10,000*g,0.5-1min。弃去流出液(透过柱子流出到离心管里的液体)。
6. 将柱子放在一个新的2ml收集管中,加上300ul RNA wash buffer I。室温离心,10,000*g, 0.5-1min。同样弃掉流出液。
7. DNase I 消化(选择性)
在我的实验中没有做这一步。
8. 将柱子再放到一个新的2ml收集管中,加入400ul RNA wash buffer I, 室温离心,10,000*g, 30s,弃流出液。
9. 将柱子放到2ml收集管中,加入500ul RNA wash buffer II(乙醇稀释过的),室温离心,10,000*g, 30s,弃流出液。注意:使用前RNA wash buffer II 必须要用无水乙醇稀释(48ml),按照标签上的说明。
10. 用500ul RNA wash buffer II洗涤一次柱子,同上一步骤一样。室温离心,10,000*g, 30s,弃流出液。然后在空收集管中,以最大转速离心柱子,≥12,000*g, 2min, 室温,使的HiBind 基质完全干燥。
11. 转移柱子到一个新的1.5ml的Ep管中,(试剂盒中没有提供),加入50-100ul的DEPC水洗脱柱子(试剂盒中提供)。确保水直接加到了柱子的基质上。10,000*, 1min, 室温。如果RNA的总量大于30ug,可以进行二次洗脱。
注意:可以选择性地,用大一点的体积洗脱RNA。如果进行二次洗脱,总RNA的量会增加,但是浓度会降低,因为80%以上的RNA会在第一次时被回收。在加柱子前将水加热到65℃并室温孵育柱子5min会增加产量。
TRIZOL试剂123
李向tao2017-10-03
主要成分:

TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质,但不能完全抑制RNA酶活性,因此TRIzol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase(RNA酶)。
TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂,在样品裂解或匀浆过程中,TRIZOL 能保持RNA完整性。加入氯仿后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中。取出水相,用异丙醇可沉淀回收RNA。
※0.1%的8-羟基喹啉可以抑制RNase,与氯仿联合使用可增强抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失,导致细胞结构降解,核蛋白迅速与核酸分离。
※β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂,可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性,因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。

基本特点
Trizol试剂可以快速提取人、动物、植物、细菌不同组织的总RNA,该方法对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。TRIZOL试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIZOL抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。并且利用DNA、RNA和蛋白质在不同溶液中的溶解性质,可以通过分层分别将不同层中的RNA(上层)、DNA(中层)、蛋白质(下层)分离纯化出来,效率极好。
Trizol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7 kb和15 kb之间不连续的高分子量条带,(mRNA和hnRNA成分)两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb (28S)和~2 kb (18S),低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (tRNA,5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8

TRIZOL
http://baike.baidu.com/view/533842.htm
TRIZOL裂解细胞
氯仿萃取RNA
异丙醇沉淀RNA
酒精清洗
有很多。我选了其中一个试剂盒供参考。SunShineBioTM 总RNA提取试剂盒。向左转|向右转

RNA提取对于科研人员来说并不陌生,但是要得到好的结果却不是一件很容易的事情。事实上,现在市面上的丰富的RNA提取试剂基本上可以满足科研人员的需要,为什么往往提取的RNA却容易失败呢?

RNA提取失败的主要现象有三个:提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA纯度低。究竟怎样才能确保RNA提取的成功率呢?

首先,要确定材料的可用性。尽管现有的RNA提取试剂都用抑制RNase的成分,但提取的材料仍需谨慎处理。提取的材料的新鲜度是获取完整RNA的关键,但是由于种种原因无法立即从新鲜材料中提取RNA时,使用Takara公司的样品保护剂SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低温冰箱的不便,同时也可以有效解决组织、细胞样品的短时间保存及运输问题。此外,如果将不同时期收集的样品都预先存放于本试剂中,可以做到立即终止并固定RNA表达的时序变化,减少实验组间的误差。

其次,选择合适的提取试剂是最重要的一步。好的提取试剂在确保成功的同时,操作方便且经济实用。对于动物组织、简单的植物材料、各种微生物、培养细胞的totalRNA提取,Takara公司的RNAisoPlus具有诸多的成功案例。随着2013年7月柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,进一步丰富了TakaraRNA提取的产品线。该产品采用了独特的细胞裂解系统,无需苯酚氯仿抽提等步骤,简单快捷。组织或细胞裂解后,提取操作仅需20分钟便可完成。

对于富含多糖多酚的植物类组织提取是个难点,Takara精心研发的柱型提取试剂TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以轻松解决这个问题。TaKaRaMiniBESTPlantRNAExtractionKit可以高效地从各种简单的植物组织材料(叶片、茎、幼苗等)、富含多糖多酚的植物组织材料(果实、种子等)、真菌提取高纯度的TotalRNA,适用范围广泛。按照标准流程,本试剂盒可以有效地提取分子量大于200nt的RNA,也可以按照可选步骤提取得到包含SmallRNA(<200nt)的TotalRNA。试剂盒中包含了RNA提取所需的全部试剂,无需额外购买其它试剂


试剂盒提取RNA123
妞YN4w2021-08-01
看是什么试剂盒,有一些试剂盒是有专门针对性提取的,比如是提取小RNA类的,或者是提取转录组RNA类的,都有,如果是一般的没有说明的那么是总RNA的
序列特异性RNA测序文库构建时,当RNA被逆转录后,为什么需要先合成CDNA,再连接头,最后再降解掉二次合成的cDNA呢?为什么不能直接逆转录后加接头?希望资深人士帮忙解答疑问。谢谢!
此方法出自以下文章High-ThroughputIlluminaStrand-SpecificRNASequencingLibraryPreparation(ColdSpringHarborProtocol)
各位兄弟姐妹,谁知道有质优价廉的血清/血清总RNA提取试剂盒嘛?(血清microRNA逆转录,定量PCR验证试验)
--本来,看好丹麦Exiqon公司,Qiagen的两个试剂盒,无奈经费有限,这两个盒子很不错,价格也不菲,有米的兄弟姐妹可以买。
--另外查询到国产上海诺伦公司的血液(血清/血浆)总RNA抽提试剂盒--广州这边用的人不多,不知道上海那边的兄弟姐妹有什么经验?
产品编号
产品名称
产品包装
价格
说明书
LN-0111A
血液(血清/血浆)总RNA抽提试剂盒
50次
400.00元
LN-0111B
100次
720.00元

---还有,北京康为世纪公司的游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂,货号:CW2281,也比较便宜,但是俺心中也没有底,请大家给点意见。
---已经订购了LIFETECHNOLOGY的TrizolLS专门提取体液RNA的试剂(100毫升2000元人民币,也不菲),准备预试验看看提取RNA的质量。(Lifetechnology公司的AM1556也不错,但是也不便宜,每个盒子40次/2590元)
----但是还是希望有试剂盒,比较简单,快捷,最重要的是样本量太大,要分离400份左右的血清。
想请问各位大神~哪个厂家的真菌RNA提取的试剂盒性价比高点呀~~本人毕业论文,想做基因表达的~~查了一下天根RNAprepPure植物总RNA提取试剂盒,跟生工的酵母总RNA快速抽提试剂盒与真菌总RNA快速抽提试剂盒,就想在这三个里面选~~但天根的比较贵呀~~生工的效果有不知道如何~?想问一下各位有木有用过这几个试剂盒的?那样好一点呀~~求回复~~~~谢谢各位了~
一场灾难正在悄悄的酝酿,人不知鬼不觉地来临.十四时二十八分,这个恐怖的时间,一场灭顶之灾从天而降,以四川省汶川为震中心的8.0级地震吞噬了人们美好的梦,这场地震摧毁了人们的家园,殃及了多个省市和地区,顿时,电力中断,交通瘫痪,山体崩塌,河水泛滥,灾区人民陷入了水深火热之中,汶川,这个在地图上鲜为人知的地方,人们很少谈起的地方,在一瞬间成为海内外人民关注的焦点,也就是那时,人们便发扬爱的精神,向灾区人民伸出援助之手,国务院在第一时间下达命令,派出国内的搜救精英赶往灾区,以“众志成城,抗震救灾”为口号,“时间就是生命,灾情就是命令”为主要目标,争分夺秒的抢救灾民,
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